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Actividad antibacteriana de los extractos secos de Turnera ulmifolia L frente a bacterias productoras de piodermitis

propuesto determinar la actividad antibacteriana de los extractos secos de las tinturas al 20% de raíces y flores obtenidos de Turnera ulmifolia L frente a Staphylococcus aureus ATCC 33862 y Streptococcus beta hemolítico del grupo A ATCC 23941.

Metodología

Para este trabajo se emplearon 2 cepas bacterianas:

  • Staphylococcus aureus ATCC 33862.
  • Streptococcus beta hemolíticos del grupo A ATCC 2349.

A partir de un crecimiento puro, se preparó una suspensión bacteriana a una concentración de 1.5 x 108 UFC/mL utilizando el método turbidimétrico de comparación de Mac Farland (0.5).

Los extractos a probar fueron obtenidos a partir de las tinturas al 20% de raíces y flores de Turnera ulmifolia L disueltos en dimetilformamida. Las concentraciones máximas de cada uno calculados sobre la base de peso seco de productos solubles totales fueron de 0.4 mg/mL.

Evaluación de la actividad antibacteriana:

La evaluación de la actividad antibacteriana de los extractos se efectuó en 3 etapas.

La primera etapa (Tamizaje General) consistió en una prueba cualitativa para determinar la presencia de actividad antimicrobiana en los productos y las cepas susceptibles a ellas. Para ello se empleó el método de difusión radial en medio agarizado de Grove y Randall descrito en 1955 (17) modificado. Para esta investigación se tomó un tubo con 15 mL de medio de cultivo fundido, agar nutriente para la cepa de Staphylococcus aureus ATCC 33862 y agar sangre de carnero para el Streptococcus beta hemolítico del grupo A, ATCC 23491 y se le añadió 1 mL del inóculo bacteriano, se homogenizó y se vertieron en placas Petri (Alumbra, China) de 90 mm de diámetro, con un espesor de 3-4 mm del medio de cultivo (BioCen, Cuba) (pH 7,3 ± 0,2).

Posteriormente a la solidificación con un orador de metal estéril se hicieron cortes cilíndricos de 3 mm de diámetros cada uno, los cuales se colocaron a una distancia no menor de 10 mm del borde de la placa y una separación entre ellos no menor de 30 mm para evitar la superposición de los halos de inhibición. Los extractos secos se adicionaron con una pipeta semiautomática de Ependorf (10 microlitros por pocillo). Se realizaron 3 determinaciones por cepas y se colocó un control con dimetilformamida como control negativo y como control positivo y de calidad se utilizó un disco de antibiótico comercial de amplio espectro para cepas bacterianas, la ciprofloxacina (CIP 5) con una marca Liofilchem, Italia y una concentración de 5 µg /Disco.

Después de terminada esta etapa, se prosiguió a una segunda para determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de los productos. Para ello se empleó el mismo método descrito anteriormente, utilizando diluciones seriadas del mismo.

Seguidamente pasamos a la tercera etapa que consistió en la determinación de la Concentración Mínima Bactericida (CMB). En esta determinación se empleó el método de diluciones dobles seriadas en medio líquido con pases a medios agarizados a las 24 horas de incubación. (18)

Resultados y Discusión

La Tabla 1 resume los resultados obtenidos en la evaluación ¨in vitro¨ de la actividad antibacteriana de la especie, evidenciándose en las dos partes de la planta, frente a las cepas en estudios, destacándose los halos de inhibición proveniente de las flores en las dos cepas bacterianas, esto puede deberse, a que éste, es el órgano de la planta en donde mayor actividad metabólica debe existir por el proceso de fotosíntesis que realiza y donde están los órganos de reproducción, por lo tanto, mayor formación de metabolitos secundarios. El resultado obtenido fue a través del cálculo de la media para hallar su valor promedio.

Tabla # 1 Resultados del tamizaje de los extractos secos obtenidos a partir de las tinturas al 20% de las raíces y flores de la Turnera ulmifolia L.

Ver: Actividad antibacteriana de los extractos secos de Turnera ulmifolia L frente a bacterias productoras de piodermitis – Anexos, al final del artículo

Leyenda: (-) No hubo inhibición del crecimiento bacteriano.

Estos resultados, conjuntamente con la ausencia de halo de inhibición para la Dimetilformamida (control negativo), sugieren que las raíces y flores de la Turnera ulmifolia L presentan metabolitos secundarios fundamentalmente con actividad antiestafilocócica y antiestreptocócica los cuales son solubles en Dimetilformamida. Se utilizó el control con Dimetilformamida porque se plantea que no tiene actividad antibacteriana, (19) corroborándose en nuestro trabajo, al encontrarnos ausencia del halo de inhibición en dicho control.

Al comparar la bioactividad de los extractos y la Ciprofloxacina (control positivo) antibiótico comercial, se pudo demostrar que los halos de inhibición son mayores en esta última. La diferencia en el diámetro de los halos podría atribuirse a la baja concentración de los constituyentes químicos presentes en el extracto vegetal con actividad antibacteriana. Pero losresultados no son desalentadores,por cuanto hay que tener en cuenta la diferencia de las concentraciones de los principios activos entre los discos de antibióticos comerciales y los que contienen los extractos vegetales de las raíces y flores de Turnera ulmifolia L.

En este sentido los discos comerciales de antibióticos contienen el principio activo con altos niveles de pureza, en tanto, los extractos vegetales presentan concentraciones en las que pueden variar las cantidades de metabolitos secundario presentes en ellos. Si se comparan estos resultados con los obtenidos en otras investigaciones donde se utilizan plantas para enfrentar bacterias causantes de enfermedades dérmicas se puede decir que son similares en cuanto a los halos de inhibición obtenidos manifestando una acción limitante en el crecimiento de la bacteria en forma evidente. En este sentido investigaciones similares fueron realizada por Vengoa et al (2000) (20) los cuales realizaron un amplio estudio sobre la actividad antibacteriana in vitro en cepas de Staphylococcus aureus y Streptococcus sp donde muestran resultados similares a los obtenidos en este trabajo, empleando concentraciones alrededor de los 400 µg/disco.

Otros resultados se obtuvieron por Mothana et al (2009) (21), trabajando con 26 especies de plantas pertenecientes a 17 familias botánicas diferentes, en los cuales se realizaron extracciones con metanol, los resultados arrojaron que 23 de estas plantas mostraron actividad antiestafilocócica empleando concentraciones 8 veces mayor a la empleada en