de 2013 a una temperatura de 22 ºC, de acuerdo con los requisitos de agrotecnia establecidos, para no afectar los principios activos. Fracciones (hojas y tallo y fotografías de la planta en su medio natural. El material se lavó y desinfectó con una solución de hipoclorito de sodio 2%, se secó a la sombra a temperatura ambiente extendiéndose en bandejas perforadas, volteándose a diario durante 7 días; luego se sometió a temperatura de 40°C durante 1 h en estufa (MWN, Alemana) con circulación de aire. Seguidamente se procedió a su pulverización, usando un molino de cuchilla y fue utilizado en la elaboración de los diferentes extractos y tinturas 4
Preparación de extractos vegetales
Se utilizó en las extracciones sucesivas, solventes de polaridad creciente (éter, etanol y agua). Para la extracción de los metabolitos secundarios en cada fracción, se empleó la extracción asistida por ultrasonido, utilizándose un baño ultrasónico (Cleaner SB -3200 DTD, China).4 Para la obtención de estos extractos se pesaron 2,5 g de materia seca en balanza técnica (BS 2202S, SARTORIUS, Alemania) y se le añadieron 25 mL de éter de petróleo. Después de dos horas en ultrasonido a una temperatura de 35 °C y frecuencia de 40 KHZ se procedió a filtrar el extracto a presión reducida. Al remanente se le añadieron 25 mL de etanol 70% (v/v) realizándose el mismo procedimiento; una vez filtrado, al remanente se le añadió finalmente 25 mL de agua destilada y se repitió el proceso que se realizó a las dos extracciones anteriores. Los tres extractos obtenidos fueron almacenados en frascos de color ámbar para la conservación de los principios activos 5
Las tinturas al 20% de la planta se obtuvieron a partir de 50 gr del polvo de las hojas y raíces, utilizando como menstruo una solución hidroetanólica al 70% (v/v), por extracción con ultrasonido durante dos horas, se obtuvieron 250 mL de la tintura al 20%, que se dejaron en reposo a una temperatura entre 4–8°C, durante 3 días. Seguidamente se filtró a presión reducida, almacenándose en frascos de color ámbar 6
Los extractos secos se obtuvieron a partir de 100 mL de las tinturas al 20%, mediante concentración en evaporador rotatorio a una temperatura de 40ºC, fueron triturados y pulverizados en un mortero y guardados en frascos de color ámbar.
Tamizaje fitoquímico
Se realizó en el Laboratorio de Productos Naturales del Centro de Estudio de Química Aplicada (CEQA) de la Universidad de Granma (UDG), Bayamo, Cuba, por la metodología reportada para la determinación de los diferentes metabolitos secundarios, ejecutándose tres réplicas de cada ensayo. 7-8
La composición fitoquímica fue corroborada mediante análisis por cromatografía en capa fina 9. Las corridas se realizaron en placas cromatográficas con soporte de aluminio (Sílica gel 60, F254, espesor 0.2 mm, Merck, Alemania). La detección se efectuó por irradiación con una lámpara de luz ultravioleta (YL WD- 9403E, China) a una longitud de onda de 254 y 365 nm. Dos sistemas de solvente se usaron para las corridas: 10
Solvente A: acetato de etilo-metanol-agua (10:2:1) para el análisis de los compuestos polares en los extractos etanólicos y acuosos.
Solvente B: tolueno-acetato de etilo (9:1) para el análisis de los compuestos lipófilos en los extractos etéreos.
Resultados
El tamizaje fitoquímico realizado a los extractos etéreo, etanólico y acuoso de las hojas y tallos de Desmodium Canum reveló la existencia de una amplia diversidad de metabolitos primarios y secundarios de interés farmacológico. En los extractos etéreos resaltan por su abundancia los alcaloides, cumarinas, y ácidos grasos 11-12. En los extractos etanólicos se destacan por su mayor concentración la presencia de alcaloides, cumarinas, triterpenos fenoles y/o taninos, carbohidratos reductores. Se identifican además en el extracto acuoso carbohidratos reductores, flavonoides, fenoles y/o taninos en ambas partes de la planta. 13 (Tabla 1).
Por su parte las tinturas al 20% de hojas y tallos de Desmodium Canum mostraron resultados muy similares en cuanto a su composición fitoquímica a los encontrados para los extractos etanólicos, identificándose abundantes alcaloides en las hojas. El tamizaje fitoquímico de los extractos secos obtenidos reveló resultados muy similares a los de las tinturas al 20% con un incremento en la concentración de alcaloides 14 (Tabla 2).
El análisis de la composición fitoquímica mediante cromatografía en capa fina permitió corroborar los resultados del tamizaje fitoquímico, detectándose la presencia de alcaloides, cumarinas y taninos (Fig. 1 y 2).
Discusión
El análisis fitoquímico de la planta Desmodium Canum reveló la presencia de alcaloides, cumarinas, flavonoides, fenoles y/o taninos, quinonas y antocianidinas con diferencias en cuanto a su distribución entre las hojas. 7-8 Los estudios químicos realizados a otras especies Desmodium Canum: Dtriflorum(L), DC(meibonia triflora Kuntze), Desmodium incanum., reportan el aislamiento de alcaloides en hojas, tallos y flores de esta planta; lo cual corrobora los resultados obtenidos en esta investigación donde fueron identificados alcaloides en todos los extractos evaluados. 15
En la tabla 1 se puede observar que en los extractos etéreos tanto de hojas como de tallos, se detecta la presencia de alcaloides, cumarinas y quinonas. Se infiere que estos metabolitos secundarios sean de baja polaridad. En esta fase no se observa en abundancia a ninguna de estas sustancias. 16
En el extracto etanólico de las hojas se observa en abundancia la presencia de alcaloides, cumarinas, fenoles y/o taninos, quinonas. Mientras que en el extracto de tallos se observa en abundancia la presencia de antocianidinas. En ambos extractos es donde se detectan la