1.<\/sup><\/b> <\/b>Profesor Asociado. Departamento de Ciencias Naturales. Universidad Popular del Cesar- Grupo GICBIO, Universidad de Antioquia- Grupo GENPOP.<\/p>\n 2<\/sup>. Estudiante Lic. Ciencias Naturales. Director Grupo GICBIO. Universidad Popular del Cesar- Sede Sabanas<\/b><\/p>\n Valledupar- Cesar- Colombia<\/p>\n MATERIALES Y M\u00c9TODOS:<\/b> Se obtuvo una muestra de sangre de un individuo no expuesto a factores carcinog\u00e9nicos, cultivando sus linfocitos y trat\u00e1ndolos con diferentes dosis de Malathion. Los cromosomas fueron analizados por el test de aberraciones cromos\u00f3micas.<\/p>\n RESULTADOS<\/b>: Las c\u00e9lulas sin tratamiento mostraron 1% de alteraciones cromos\u00f3micas, mientras que las tratadas a 24 horas con dosis de 0.450 mg\/ml presentaron 10% de da\u00f1os. Las c\u00e9lulas tratadas durante 48 horas alcanzaron 15% de alteraciones cromos\u00f3micas.<\/p>\n DISCUSI\u00d3N: <\/b>Los da\u00f1os cromos\u00f3micos m\u00e1s frecuentes fueron los quiebres cromat\u00ednicas y los quiebres cromos\u00f3micos. Estos resultados sugieren que las personas expuestas a este pesticida tienen mayor riesgo de presentar alteraciones cromos\u00f3micas que aquellas personas no expuestas.<\/p>\n CONCLUSI\u00d3N:<\/b> El Malathion tiene la capacidad de inducir alteraciones cromos\u00f3micas en linfocitos humanos.<\/p>\n PALABRAS CLAVE<\/b>: Genotoxicidad, Malathion, aberraciones cromos\u00f3micas.<\/p>\n GENOTOXIC ASSESSMENT IN VITRO OF HUMAN LYMPHOCYTES TREATED WITH MALATHION <\/b><\/p>\n INTRODUCTION: <\/b>In Colombia there are actually human populations living in areas of pesticides stored and \/ or buried. One of the pesticides found in the most polluted area is the Malathion, therefore could be a genotoxic risk in these populations.<\/p>\n OBJETIVE: <\/b>To <\/b>determine the genotoxic effect of the pesticide Malathion on human lymphocytes using chromosomal aberration test, using concentrations of 0.125, 0.250 and 0.45 mg \/ ml for 24-48 hours of treatment. <\/b><\/p>\n MATERIAL AND METHODS: <\/b>We obtained a blood sample from an individual not exposed to carcinogenic factors. Lymphocytes were cultured and treated with different doses of Malathion. The chromosomes were analyzed for chromosomal aberration test.<\/p>\n RESULTS:<\/b> Untreated cells showed 1% chromosomal abnormalities, whereas those treated at 24 hours with doses of 0.450 mg \/ ml showed 10% of damage. Cells treated for 48 hours reached 15% of chromosomal alterations.<\/p>\n DISCUSION<\/b>: The most frequent chromosomal damage were chromatid breaks and chromosome breaks. These results suggest that people exposed to this pesticide have increased risk of chromosomal abnormalities than those not exposed. <\/b><\/p>\n CONCLUSION<\/b>: Malathion has the ability to induce chromosomal abnormalities in human lymphocytes.<\/b><\/p>\n Key words: <\/b>genotoxicity, Malathion, chromosomal aberrations. <\/b><\/p>\n Introducci\u00f3n<\/b><\/p>\n Los pesticidas constituyen una categor\u00eda heterog\u00e9nea de sustancias qu\u00edmicas dise\u00f1adas espec\u00edficamente para controlar animales, vegetales, microorganismos o virus entre otros. Todas las personas est\u00e1n inevitablemente expuestas, en menor o mayor grado, al riesgo de contaminantes ambientales, por exposici\u00f3n ocupacional u otra. Dentro los pesticidas se encuentran los organoclorados, organofosforados y Carbamatos(1). En 1960, el municipio de Agust\u00edn Codazzi, localizado al norte del departamento del Cesar (Colombia), se convirti\u00f3 en el primer productor de algod\u00f3n a nivel nacional.<\/p>\n En la \u00e9poca de los 90\u00b4, se inici\u00f3 la quiebra de la industria algodonera en la regi\u00f3n, quedando grandes cantidades de pesticidas sin utilizar, por lo cual se recurri\u00f3 a enterrar dichos plaguicidas. Debido a problemas pol\u00edticos y sociales, estas zonas contaminadas con pesticidas, fueron habitadas por poblaciones humanas. El Ministerio del Medio Ambiente, a trav\u00e9s de una empresa privada, document\u00f3 que los principales pesticidas pod\u00edan ser: DDT, Arsenato de plomo, Toxafeno, Metil Paration, y Malathion (2). Informes oficiales reportaron 70 canecas de pesticidas enterradas en zonas habitadas por personas. Algunos de los pesticidas reportados en este informe son DDT, Paration, Endosulfan y Toxafeno, entre otros (3).<\/p>\n En el a\u00f1o 2004 se realiz\u00f3 un estudio fisicoqu\u00edmico a algunas muestras urbanas de suelo del municipio de Codazzi, y se encontr\u00f3 que el suelo estaba contaminado con el pesticida organoclorado Toxafeno en una concentraci\u00f3n de 25.67 ppm\/kg de suelo (4). Estudios adicionales realizados a muestras de suelo, y paredes fabricadas con barro de la misma zona, demostraron la presencia de pesticidas organofosforados tales como Coumaphos en una concentraci\u00f3n que oscil\u00f3 entre 1.02 y 9,17 mg\/ml, Malathion a una concentraci\u00f3n de 5.932.92mg\/ml, y Mevinphos a una concentraci\u00f3n de 2.92mg\/ml (5). En el a\u00f1o 2011, estudios ambientales oficiales reportaron Malathion, Metil Paration y Endosulfan en muestras de suelo de este municipio (resultados no publicados). De acuerdo a la FAO, en Colombia en el 2003, hab\u00eda casi el 50% de los pesticidas obsoletos de Am\u00e9rica Latina con 5.436.000 kg de pesticidas almacenados (6).<\/p>\n El Malathion fue asociado con da\u00f1o en el ADN en poblaciones humanas en Croacia, India y Ecuador (7-11). Adem\u00e1s este pesticida se ha demostrado que tiene la capacidad de inducir la aparici\u00f3n de tumores en ratas (12). El Instituto Nacional de Cancerolog\u00eda de Colombia ha reportado que este municipio tiene tasas de c\u00e1ncer ajustadas por edad, superiores a las del resto del departamento del Cesar, y que esto puede estar asociado a la presencia de los pesticidas encontrados (13). Dado que el Malathion es uno de los pesticidas con la mayor concentraci\u00f3n encontrados dentro de las viviendas de algunas zonas del municipio de Codazzi, y debido a los reportes que asocian este pesticida con efectos carcinog\u00e9nicos, el objetivo de este estudio fue determinar el efecto genot\u00f3xico del pesticida Malathion sobre linfocitos humanos, utilizando la prueba de aberraciones cromos\u00f3micas, empleando concentraciones de 0.125, 0.250 y 0.45 mg\/ml durante 24 y 48 horas de tratamiento.<\/p>\n <\/p>\n Materiales y m\u00e9todos<\/b><\/p>\n Para la toma de muestra de sangre, se recurri\u00f3 a un individuo sano de sexo masculino, de aproximadamente 40 a\u00f1os de edad, quien reporta no haber estado expuesto a pesticidas, no fumador, no consumidor de bebidas alcoh\u00f3licas, ni expuesto a agentes reportados como mutacarcinog\u00e9nicos.<\/span><\/p>\n El test de alteraciones cromos\u00f3micas se realiz\u00f3 siguiendo el procedimiento descrito por Hoyos- Giraldo L.E (14). Una vez obtenido el consentimiento informado, se tomaron dos muestras de 10 ml de sangre perif\u00e9rica en tubos con heparina. Posteriormente se sembraron 16 gotas de sangre en 7.2 ml de medio RPMI suplementado con suero fetal bovino al 10%. Se indujo la mitosis empleando 280 ul de fitohemaglutinina. Transcurridas 40 horas, se adicionaron las cantidades siguientes de pesticida Malathion disuelto en agua tridestilada: 0, 125, 0.250 y 0.45 mg\/ml.<\/p>\n Las muestras se distribuyeron en dos grupos de siete tubos: siete tubos fueron tratados con concentraciones de Malathion durante 24 horas, y los otros siete fueron tratados por un tiempo de 48 horas utilizando las mismas concentraciones de pesticida. El control negativo, correspond\u00eda a cultivos de linfocitos sin tratamiento. Los tratamientos se hicieron por duplicado. Se emple\u00f3 Malathion comercial al 57%. Una vez transcurrido el tiempo de exposici\u00f3n, se adiciono el Colcemid, por un tiempo de dos horas. Las muestras se incubaron durante 7 minutos con una soluci\u00f3n hipot\u00f3nica de KCl 0.082M. Posteriormente se realizaron tres lavados con soluci\u00f3n fijadora de metanol: \u00e1cido ac\u00e9tico 3:1. Se realiz\u00f3 el extendido de las metafases, en dos placas por cada tubo. Finalmente se hizo la coloraci\u00f3n con Giemsa al 2%. Para el an\u00e1lisis se evaluaron cien mitosis por cada placa. El an\u00e1lisis estad\u00edstico se realiz\u00f3 con el software Statgraphic, con el cual se realiz\u00f3 el an\u00e1lisis de varianza y la prueba de correlaci\u00f3n, con una significancia de 95%.<\/p>\n Resultados<\/b><\/p>\n Para los cultivos de linfocitos tratados durante 24 horas, se encontr\u00f3 que los linfocitos no tratados con el pesticida Malathion, solo presentaban en promedio 1% de alteraciones cromos\u00f3micas, mientras que los linfocitos tratados con diferentes dosis (0.125, 0.250 y 0.456 mg\/ml de Malathion) presentaban valores que fueron dosis dependiente, pues a concentraciones m\u00e1s altas de pesticida, mayor fue el promedio de porcentajes de alteraciones cromos\u00f3micas, alcanzando valores de 10% en promedio para los linfocitos tratados con dosis de 0.456mg\/ml durante un tiempo de 24 horas de tratamiento (tabla 1).<\/p>\n Para el caso de los cultivos tratados durante 48 horas, se observ\u00f3 que alcanzaron el 15% de alteraciones cromos\u00f3micas con una concentraci\u00f3n de 0.456 mg\/ml. El an\u00e1lisis del tipo de alteraciones cromos\u00f3micas encontradas, determin\u00f3 que las alteraciones cromos\u00f3micas encontradas corresponden a quiebres de cadena sencilla, y quiebres de cadena doble, y cromosomas dic\u00e9ntricos con unos valores de 57.37%, 40,98% y 1.64% respectivamente (Ver figura 1).<\/p>\n Concentraci\u00f3n (mg\/ml Malation) – Alteraciones cromos\u00f3micas. 24 horas de tratamiento (promedio) \u2013<\/p>\n Alteraciones cromos\u00f3micas 48 horas de tratamiento (promedio)<\/p>\n 0 \u2013 1 – 1<\/p>\n 0.125 \u2013 3 – 3<\/p>\n 0.250 \u2013 5 – 7<\/p>\n 0.456 \u2013 10 – 15<\/p>\n Tabla 1. Resultado de alteraciones cromos\u00f3micas en cultivos de linfocitos humanos tratados con Malathion a concentraciones de 0, 0.125, 0.250 y 0.456 mg\/ml durante 24 48 horas. <\/b><\/p>\n Al comparar los resultados obtenidos para las dosis de 0.25 y 0.45mg\/ml, en los dos tiempos analizados, se puede observar el incremento de alteraciones cromos\u00f3micas en los linfocitos tratados durante 48 horas en comparaci\u00f3n a los tratados durante 24 horas, lo cual indica que a mayor tiempo de exposici\u00f3n mayor es el nivel de da\u00f1o gen\u00e9tico producido (ver figura 2).<\/p>\n En las c\u00e9lulas tratadas durante 48 horas con dosis de 0.45 mg, se observaron c\u00e9lulas con m\u00e1s de dos alteraciones cromos\u00f3micas, efecto que no se observ\u00f3 en las c\u00e9lulas tratadas por 24 horas. Al realizar el an\u00e1lisis de varianza, se determin\u00f3 que el valor de p<\/i> es menor de 0.001, lo cual demuestra una relaci\u00f3n estad\u00edsticamente significativa entre el tiempo, la concentraci\u00f3n y el n\u00famero de aberraciones cromos\u00f3micas, a un nivel de confianza de 99%. Se observa una relaci\u00f3n proporcional entre la concentraci\u00f3n del pesticida y el porcentaje de alteraciones cromos\u00f3micas encontradas.<\/p>\n Tambi\u00e9n se pudo determinar que el tiempo de exposici\u00f3n al pesticida Malathion, influye en la frecuencia de las alteraciones cromos\u00f3micas, pues se obtuvieron mayores niveles de da\u00f1o en las c\u00e9lulas tratadas durante 48 horas de exposici\u00f3n, en comparaci\u00f3n a las tratadas durante un tiempo de 24 horas. El Coeficiente de correlaci\u00f3n de 0.90, lo cual indica la relaci\u00f3n existente entre la frecuencia de alteraciones cromos\u00f3micas y las concentraciones de Malathion analizadas en el presente estudio. El Malathion es un pesticida organofosforado frecuentemente utilizado en labores agr\u00edcolas en muchos pa\u00edses, incluyendo Colombia.<\/p>\n En India, se han reportado resultados positivos de asociaci\u00f3n entre mezclas de pesticidas, tales como el Malathion, Metyl Paration, DDT, Toxafeno entre otros, e incremento en los niveles de da\u00f1o en el ADN (16, 17). En cuatro estudios diferentes realizados con ratas, se observan resultados positivos de asociaci\u00f3n, destac\u00e1ndose la capacidad de incrementar el nivel de da\u00f1o en el ADN y la formaci\u00f3n de tumores mamarios, en mezcla con el Metil Paration (12,18,19,20). Adicionalmente se han realizado estudios in vivo empleando ratones, y se ha demostrado que el pesticida evaluado en este estudio, induce da\u00f1o a nivel del ADN cuando se emplean concentraciones de 2.5, 5 y 10 mg\/ml (21).<\/p>\n Figura 1. Cromosomas dic\u00e9ntricos (A) y fracturas cromat\u00eddicas (B) observadas en los linfocitos humanos tratados con Malathion<\/b>.<\/p>\n <\/p>\n Este pesticida se ha encontrado en algunas muestras de suelos de \u00e1reas habitadas por poblaciones humanas en el departamento del Cesar. La Agencia Internacional para la Investigaci\u00f3n en C\u00e1ncer (IARC) ha clasificado este pesticida en la clase III: no clasificable como carcin\u00f3geno a humano (15). Los resultados obtenidos en el presente trabajo, demuestran que este pesticida tiene la capacidad de inducir alteraciones cromos\u00f3micas tales como quiebres cromat\u00eddicos, quiebres cromos\u00f3micos y cromosomas dic\u00e9ntricos. Estos resultados coinciden con los reportes que se tienen en la literatura en los que se ha demostrado que poblaciones humanas expuestas al pesticida Malathion tienen incrementados los niveles de alteraciones cromos\u00f3micas en comparaci\u00f3n a los niveles encontrados en las poblaciones no expuestas (1).<\/p>\n![\"cromosomas-dicentricos\"](\"http:\/\/www.revista-portalesmedicos.com\/revista-medica\/wp-content\/uploads\/1-cromosomas-dicentricos.png\")
<\/a><\/a>