{"id":36513,"date":"2016-02-08T22:26:00","date_gmt":"2016-02-08T21:26:00","guid":{"rendered":"http:\/\/www.revista-portalesmedicos.com\/revista-medica\/?p=36513"},"modified":"2016-02-08T22:26:01","modified_gmt":"2016-02-08T21:26:01","slug":"estudio-fitoquimico-desmodium-canum-empanadilla","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.revista-portalesmedicos.com\/revista-medica\/estudio-fitoquimico-desmodium-canum-empanadilla\/","title":{"rendered":"Estudio fitoqu\u00edmico de extractos y tinturas al 20% de hojas y tallos de Desmodium Canum (empanadilla) que crece en Cuba"},"content":{"rendered":"

Estudio fitoqu\u00edmico de extractos y tinturas al 20% de hojas y tallos de Desmodium Canum (empanadilla) que crece en Cuba.<\/strong><\/h1>\n

Introducci\u00f3n:<\/strong> La planta Desmodium Canum <\/strong>conocida como empanadilla, pega-pega que crece en Cuba, es apreciada por sus poderes curativos, con caracter\u00edsticas de ser una hierba perenne com\u00fan en terrenos yermos, m\u00e1rgenes de r\u00edos, faldas de colinas y matorrales en lugares bajos o de mediana elevaci\u00f3n.<\/p>\n

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Estudio fitoqu\u00edmico de extractos y tinturas al 20% de hojas y tallos de Desmodium Canum (empanadilla) que crece en Cuba.<\/strong><\/p>\n

Autores:<\/strong><\/p>\n

Lic. Lourdes Eng Rodr\u00edguez .Profesora Asistente. Universidad de Granma Facultad de CINE. Departamento de Qu\u00edmica.<\/p>\n

MsC. Sandra Rod\u00e9s Reyes. Autor responsable de sostener correspondencia, Profesora Asistente. Universidad de Granma, Facultad de CINE. Departamento de Qu\u00edmica.<\/p>\n

Dr.C. Manuel Almeida Saavedra .Profesor Titular. Centro de Estudio de Qu\u00edmica Aplicada. Facultad de Ciencias T\u00e9cnicas. Universidad de Granma.<\/p>\n

MsC. Ricardo Mario Castillo Galiano. Profesor Asistente. Universidad de Granma, Facultad de CINE. Departamento de Qu\u00edmica.<\/p>\n

Universidad de Granma. Centro de Estudios de Qu\u00edmica Aplicada<\/p>\n

RESUMEN<\/strong><\/p>\n

Existen reportes etnobot\u00e1nicos sobre el empleo del cocimiento de la ra\u00edz para tratar la disenter\u00eda y los pujos. En Oriente se usa como diur\u00e9tico, estomacal y contra las enfermedades del h\u00edgado. En Camag\u00fcey la usan de forma seca para ba\u00f1os y algunas personas tambi\u00e9n han asegurado que es muy eficaz contra la hemoptisis. Al Desmodium Canum se le atribuyen varias propiedades a\u00fan no comprobadas, sin embargo, no se reportan estudios de su actividad bactericida. Con esta investigaci\u00f3n se pretende determinar su actividad bactericida, manteniendo baja toxicidad del producto natural.<\/p>\n

Objetivo: <\/strong>Identificar los metabolitos secundarios de inter\u00e9s biol\u00f3gico presentes en la especie Desmodium Canum, a trav\u00e9s del tamizaje fitoqu\u00edmico de los extractos obtenidos de las hojas y tallos y evaluar su posible actividad antibacteriana.<\/strong><\/p>\n

M\u00e9todos:<\/strong> Se colectaron partes representativas de la planta en la Universidad de Ciencias Pedag\u00f3gicas Blas Roca Calder\u00edo Manzanillo Provincia Granma, Cuba y se realiz\u00f3 la identificaci\u00f3n con ayuda de especialistas del Jard\u00edn Bot\u00e1nico Cupaynic\u00fa, en el municipio Guisa registrada con el n\u00famero de herbario 3045. Las hojas y tallos de la planta fueron recolectados, clasificados y seleccionados. El material fue lavado desinfectado, secado y pulverizado. El polvo de biomasa fue sometido a extracciones asistidas por ultrasonido con solventes de polaridad creciente. Posteriormente se obtuvieron los extractos et\u00e9reo, acuoso y etan\u00f3lico as\u00ed como las tinturas al 20% y los extractos secos a partir de las tinturas.<\/strong> A todos los extractos se les realiz\u00f3 el tamizaje fitoqu\u00edmico y las tinturas al 20% se estudiaron por cromatograf\u00eda de capa fina y espectroscop\u00eda ultravioleta.<\/p>\n

Resultados:<\/strong> El estudio fitoqu\u00edmico realizado a los diferentes extractos, as\u00ed como a las tinturas al 20% de Las hojas y tallos de Desmodium Canum revela una amplia diversidad de metabolitos secundarios entre los que resaltan su importancia y abundancia los alcaloides, cumarinas, carbohidratos reductores, amino\u00e1cidos libres y flavonoides, metabolitos a los cuales son con mayor probabilidad los responsables de las propiedades biol\u00f3gicas<\/p>\n

Conclusiones:<\/strong> Las saponinas, alcaloides, cumarinas y taninos presentes en Desmodium Canum pudieran ser los metabolitos responsables de los efectos terap\u00e9uticos atribuidos, resultando atractivos desde el punto de vista farmacol\u00f3gico. Se puede proceder a la evaluaci\u00f3n farmacol\u00f3gica de los preparados de esta planta para el aislamiento biodirigido y la caracterizaci\u00f3n de los posibles principios activos.<\/p>\n

Palabras clave:<\/strong> Desmodium Canum, estudio fitoqu\u00edmico, ultrasonido, extractos, tintura.<\/p>\n

Introducci\u00f3n<\/strong><\/p>\n

En el presente art\u00edculo se realiza un estudio fitoqu\u00edmico completo de las hojas y tallos para identificar las familias de metabolitos responsables de las actividades biol\u00f3gicas atribuidas de inter\u00e9s farmacol\u00f3gico para el tratamiento de infecciones microbianas 1<\/sup><\/strong>. Esta planta medicinal, es apreciada por sus poderes curativos. Existen reportes etnobot\u00e1nicos sobre el empleo del cocimiento para tratar la disenter\u00eda y los pujos. En Oriente se usa como diur\u00e9tico, estomacal y contra las enfermedades del h\u00edgado. En Camag\u00fcey la usan de forma seca para ba\u00f1os y algunas personas tambi\u00e9n han asegurado que es muy eficaz contra la hemoptisis 2<\/sup><\/strong>. De una especie hermana, Desmodium axillaris (Sw) DC. (Meibomia axillaris Kuntze), llamada amor seco, dice Grosourd\u00ed.<\/p>\n

Algunas plantas de esta familia han sido utilizadas en la medicina tradicional para la prevenci\u00f3n y tratamiento de diversas enfermedades 3<\/sup><\/strong>. Se destaca entre ellas \u00a0\u00a0\u00a0\u00a0\u00a0\u00a0\u00a0\u00a0\u00a0\u00a0\u00a0 Desmodium Canum conocido por la poblaci\u00f3n como empanadilla y pega pega; es una planta originaria de Antillas Mayores, en las Islas Mona, V\u00edrgenes, Santa Cruz, Santo Tom\u00e1s, San Juan, en la Am\u00e9rica tropical continental y en el \u00c1frica tropical. En Cuba crece en terrenos yermos de toda la Isla, m\u00e1rgenes de r\u00edos, faldas de colinas y matorrales en lugares bajos o de mediana elevaci\u00f3n. 3 <\/sup>Teniendo en cuenta que la poblaci\u00f3n cubana ha utilizado esta planta con fines medicinales para el tratamiento de diferentes enfermedades de forma emp\u00edrica, en el presente trabajo se realiza un estudio fitoqu\u00edmico completo de las hojas y tallos de Desmodium Canum para identificar las familias de metabolitos de inter\u00e9s biol\u00f3gico responsables de las actividades biol\u00f3gicas atribuidas<\/p>\n

M\u00e9todos<\/strong><\/p>\n

Partes de la planta empleada, recolecci\u00f3n y desinfecci\u00f3n.<\/p>\n

El material vegetal (hojas y tallo) se recolect\u00f3 en el municipio de Manzanillo, provincia de Granma en Cuba, a las 8.00 am del 17 de febrero <\/p>\n

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de 2013 a una temperatura de 22 \u00baC, de acuerdo con los requisitos de agrotecnia establecidos, para no afectar los principios activos. Fracciones (hojas y tallo y fotograf\u00edas de la planta en su medio natural. El material se lav\u00f3 y desinfect\u00f3 con una soluci\u00f3n de hipoclorito de sodio 2%, se sec\u00f3 a la sombra a temperatura ambiente extendi\u00e9ndose en bandejas perforadas, volte\u00e1ndose a diario durante 7 d\u00edas; luego se someti\u00f3 a temperatura de 40\u00b0C durante 1 h en estufa (MWN, Alemana) con circulaci\u00f3n de aire. Seguidamente se procedi\u00f3 a su pulverizaci\u00f3n, usando un molino de cuchilla y fue utilizado en la elaboraci\u00f3n de los diferentes extractos y tinturas 4 <\/sup><\/p>\n

Preparaci\u00f3n de extractos vegetales <\/strong><\/p>\n

Se utiliz\u00f3 en las extracciones sucesivas, solventes de polaridad creciente (\u00e9ter, etanol y agua). Para la extracci\u00f3n de los metabolitos secundarios en cada fracci\u00f3n, se emple\u00f3 la extracci\u00f3n asistida por ultrasonido, utiliz\u00e1ndose un ba\u00f1o ultras\u00f3nico (Cleaner SB -3200 DTD, China).4<\/sup><\/strong> Para la obtenci\u00f3n de estos extractos se pesaron 2,5 g de materia seca en balanza t\u00e9cnica (BS 2202S, SARTORIUS, Alemania) y se le a\u00f1adieron 25 mL de \u00e9ter de petr\u00f3leo. Despu\u00e9s de dos horas en ultrasonido a una temperatura de 35 \u00b0C y frecuencia de 40 KHZ se procedi\u00f3 a filtrar el extracto a presi\u00f3n reducida. Al remanente se le a\u00f1adieron 25 mL de etanol 70% (v\/v) realiz\u00e1ndose el mismo procedimiento; una vez filtrado, al remanente se le a\u00f1adi\u00f3 finalmente 25 mL de agua destilada y se repiti\u00f3 el proceso que se realiz\u00f3 a las dos extracciones anteriores. Los tres extractos obtenidos fueron almacenados en frascos de color \u00e1mbar para la conservaci\u00f3n de los principios activos 5<\/sup><\/strong><\/p>\n

Las tinturas al 20% de la planta se obtuvieron a partir de 50 gr del polvo de las hojas y ra\u00edces, utilizando como menstruo una soluci\u00f3n hidroetan\u00f3lica al 70% (v\/v), por extracci\u00f3n con ultrasonido durante dos horas, se obtuvieron 250 mL de la tintura al 20%, que se dejaron en reposo a una temperatura entre 4\u20138\u00b0C, durante 3 d\u00edas. Seguidamente se filtr\u00f3 a presi\u00f3n reducida, almacen\u00e1ndose en frascos de color \u00e1mbar 6<\/sup><\/strong><\/p>\n

Los extractos secos se obtuvieron a partir de 100 mL de las tinturas al 20%, mediante concentraci\u00f3n en evaporador rotatorio a una temperatura de 40\u00baC, fueron triturados y pulverizados en un mortero y guardados en frascos de color \u00e1mbar.<\/p>\n

Tamizaje fitoqu\u00edmico <\/strong><\/p>\n

Se realiz\u00f3 en el Laboratorio de Productos Naturales del Centro de Estudio de Qu\u00edmica Aplicada (CEQA) de la Universidad de Granma (UDG), Bayamo, Cuba, por la metodolog\u00eda reportada para la determinaci\u00f3n de los diferentes metabolitos secundarios, ejecut\u00e1ndose tres r\u00e9plicas de cada ensayo. 7-8<\/sup><\/strong><\/p>\n

La composici\u00f3n fitoqu\u00edmica fue corroborada mediante an\u00e1lisis por cromatograf\u00eda en capa fina 9<\/sup><\/strong>. Las corridas se realizaron en placas cromatogr\u00e1ficas con soporte de aluminio (S\u00edlica gel 60, F254<\/sub>, espesor 0.2 mm, Merck, Alemania). La detecci\u00f3n se efectu\u00f3 por irradiaci\u00f3n con una l\u00e1mpara de luz ultravioleta (YL WD- 9403E, China) a una longitud de onda de 254 y 365 nm. Dos sistemas de solvente se usaron para las corridas: 10<\/sup><\/strong><\/p>\n

Solvente A:<\/u> acetato de etilo-metanol-agua (10:2:1) para el an\u00e1lisis de los compuestos polares en los extractos etan\u00f3licos y acuosos.<\/p>\n

Solvente B:<\/u> tolueno-acetato de etilo (9:1) para el an\u00e1lisis de los compuestos lip\u00f3filos en los extractos et\u00e9reos.<\/p>\n

Resultados<\/strong><\/p>\n

El tamizaje fitoqu\u00edmico realizado a los extractos et\u00e9reo, etan\u00f3lico y acuoso de las hojas y tallos de Desmodium Canum revel\u00f3 la existencia de una amplia diversidad de metabolitos primarios y secundarios de inter\u00e9s farmacol\u00f3gico. En los extractos et\u00e9reos resaltan por su abundancia los alcaloides, cumarinas, y \u00e1cidos grasos 11-12<\/sup><\/strong>. En los extractos etan\u00f3licos se destacan por su mayor concentraci\u00f3n la presencia de alcaloides, cumarinas, triterpenos fenoles y\/o taninos, carbohidratos reductores. Se identifican adem\u00e1s en el extracto acuoso carbohidratos reductores, flavonoides, fenoles y\/o taninos en ambas partes de la planta. 13<\/sup><\/strong> (Tabla 1<\/strong>).<\/p>\n

Por su parte las tinturas al 20% de hojas y tallos de Desmodium Canum mostraron resultados muy similares en cuanto a su composici\u00f3n fitoqu\u00edmica a los encontrados para los extractos etan\u00f3licos, identific\u00e1ndose abundantes alcaloides en las hojas. El tamizaje fitoqu\u00edmico de los extractos secos obtenidos revel\u00f3 resultados muy similares a los de las tinturas al 20% con un incremento en la concentraci\u00f3n de alcaloides 14<\/sup><\/strong> (Tabla 2<\/strong>).<\/p>\n

El an\u00e1lisis de la composici\u00f3n fitoqu\u00edmica mediante cromatograf\u00eda en capa fina permiti\u00f3 corroborar los resultados del tamizaje fitoqu\u00edmico, detect\u00e1ndose la presencia de alcaloides, cumarinas y taninos (Fig. 1 y 2<\/strong>).<\/p>\n

Discusi\u00f3n<\/strong><\/p>\n

El an\u00e1lisis fitoqu\u00edmico de la planta Desmodium Canum revel\u00f3 la presencia de alcaloides, cumarinas, flavonoides, fenoles y\/o taninos, quinonas y antocianidinas con diferencias en cuanto a su distribuci\u00f3n entre las hojas. 7-8<\/sup><\/strong> Los estudios qu\u00edmicos realizados a otras especies Desmodium Canum: Dtriflorum(L), DC(meibonia triflora Kuntze), Desmodium incanum., reportan el aislamiento de alcaloides en hojas, tallos y flores de esta planta; lo cual corrobora los resultados obtenidos en esta investigaci\u00f3n donde fueron identificados alcaloides en todos los extractos evaluados. 15<\/sup><\/strong><\/p>\n

En la tabla 1 se puede observar que en los extractos et\u00e9reos tanto de hojas como de tallos, se detecta la presencia de alcaloides, cumarinas y quinonas. Se infiere que estos metabolitos secundarios sean de baja polaridad. En esta fase no se observa en abundancia a ninguna de estas sustancias. 16<\/sup><\/strong><\/p>\n

En el extracto etan\u00f3lico de las hojas se observa en abundancia la presencia de alcaloides, cumarinas, fenoles y\/o taninos, quinonas. Mientras que en el extracto de tallos se observa en abundancia la presencia de antocianidinas. En ambos extractos es donde se detectan la <\/p>\n

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mayor diversidad de metabolitos secundarios, lo cual coincide con los reportes de la literatura especializada 16-17<\/sup><\/p>\n

En el extracto acuoso de las hojas hay presencia en abundancia de alcaloides y quinonas, tambi\u00e9n se detectan cumarinas, flavonoides, fenoles y\/o taninos y antocianidinas. Para el extracto de los tallos,<\/strong> solo se observa la presencia de alcaloides y quinonas, pero ninguno de los dos en abundancia. Por lo tanto son las hojas la parte de la planta que mayor inter\u00e9s muestran para el desarrollo de la investigaci\u00f3n, atendiendo a la abundancia de metabolitos secundarios en todas las fracciones investigadas, coinciden en abundancia alcaloides y quinonas en los extractos etan\u00f3lico y acuoso de esta parte de la planta. Este resultado es semejante al obtenido por Sevimli-Gur et al 16 <\/sup>que demostraron la presencia de quinonas del tipo naftaquinonas en especies de la misma familia como Alkanna cappadocica (Boraginaceae), tambi\u00e9n se corrobora la presencia de flavonoides, alcaloides del tipo pirrolizados y quinonas del tipo naftaquinonas reportados para la especie de esta familia Cordia globosa (Jacq.) Kunth (Boraginaceae) 17 <\/sup>en Brasil.<\/p>\n

Como se puede observar en la tabla 2, no existen diferencias significativas en los resultados obtenidos en el tamizaje fitoqu\u00edmico entre tinturas y extractos secos. En la tintura al 20% de las hojas se detectan en mayor abundancia: alcaloides, carbohidratos reductores y cumarinas, mientras que en la tintura de tallos, con la excepci\u00f3n de las cumarinas y los flavonoides, se detectan los mismos metabolitos secundarios que en las hojas, pero ninguno est\u00e1 en abundancia.<\/p>\n

En el extracto seco de las hojas se detectan en abundancia: alcaloides, cumarinas y carbohidratos reductores, esto es consecuencia del incremento de la concentraci\u00f3n de estos metabolitos al eliminar el alcohol de la tintura por medio de la roto evaporaci\u00f3n, tambi\u00e9n por esta misma causa se detecta la presencia de amino\u00e1cidos libres en el extracto seco. Los resultados del tamizaje fitoqu\u00edmico de este extracto demuestran la estabilidad de los metabolitos secundarios presentes en la tintura al 20% para las condiciones experimentales empleados en la obtenci\u00f3n del mismo. 18<\/sup><\/strong> Estos resultados coinciden con los reportados para especies del mismo g\u00e9nero como: Desmodium incanum, donde fue identificada la presencia de triterpenos, esteroles, quinonas del tipo de las naftaquinonas y antraquinonas, as\u00ed como cumarinas y alcaloides en todos los extractos evaluados de estas plantas. 18<\/sup><\/strong><\/p>\n

En el extracto seco de las hojas y tallos se detectan en abundancia: alcaloides, cumarinas y carbohidratos reductores, manteni\u00e9ndose positivos los ensayos de identificaci\u00f3n de fenoles y\/o taninos, de quinonas y triterpenos y\/o esteroides, de forma similar a la tintura.<\/p>\n

El an\u00e1lisis mediante cromatograf\u00eda en capa fina mostr\u00f3 manchas de color verde y azul a una longitud de onda de 365 nm, las que son evidencia de la presencia de alcaloides, pero tambi\u00e9n de taninos y cumarinas 19<\/sup><\/strong> (Fig. 1<\/strong>. La Figura 1 muestra el cromatograma de capa fina de la tintura al 20% de las hojas, en el mismo bajo la luz ultravioleta se observa la presencia de siete tipos de compuestos, hay tres manchas de color verde con valores de Rf de 0,2500; 0,4000 y 0,4625 respectivamente, que de acuerdo con los reportes de la literatura especializada pueden ser asignadas a compuestos de base fen\u00f3lica, como cumarinas y taninos; se observa una mancha amarilla con Rf = 0,3125, que indica la presencia de compuestos fen\u00f3licos, esta mancha se asigna a las antocianidinas abundantes en este extracto, estos son compuestos con colores que comprenden desde el amarillo muy tenue hasta el rojo 20<\/sup><\/strong><\/p>\n

Se observa una 5ta mancha de color azul (Rf = 0,4375) que sugiere la presencia de alcaloides y triterpenos y\/o esteroides, que son compuestos con manchas cuyos colores van del violeta al azul. Se observan finalmente dos mancha de color marr\u00f3n con Rf de 0,5625 y 0,6500 respectivamente, que pueden ser asignadas a quinonas y cumarinas, de acuerdo a los reportes que sobre el color de estos metabolitos existen en la literatura consultada 21<\/sup>. Estos resultados corroboran los obtenidos en el tamizaje fitoqu\u00edmico de la tintura al 20% de las hojas donde se aprecia la presencia de estos mismos metabolitos secundarios.<\/p>\n

En el caso de las tallos se observan 3 grupos de compuestos, una mancha de color azul con valor de Rf = 0,0625, que indica la presencia de alcaloides y triterpenos y\/o esteroides y dos manchas amarillas con valores de Rf de 0,2500 y 0,3125 respectivamente, que pueden ser asignadas a compuestos fen\u00f3licos, antocianidinas y alcaloides, de acuerdo a los colores reportados para estos metabolitos. Estos resultados corroboran los obtenidos en el tamizaje fitoqu\u00edmico de esta tintura.<\/p>\n

En la Figura 2 se muestra el espectro ultravioleta-visible de la tintura al 20% de las hojas, en el mismo se puede observar un m\u00e1ximo en 660,40 nm que se podr\u00eda asignar a la presencia de alcaloides y quinonas. 20<\/sup><\/strong> Tambi\u00e9n se observa una se\u00f1al en los 536 nm que pudiera corresponderse con fenoles y\/o taninos y antocianidinas y otra se\u00f1al en 634 nm que se pudiera asignar a las cumarinas. Lo cual corrobora el resultado obtenido en el tamizaje fitoqu\u00edmico realizado a esta tintura donde son detectados en abundancia alcaloides, quinonas, fenoles y\/o taninos y antocianidinas. Los alcaloides constituyen una familia de metabolitos secundarios muy heterog\u00e9nea que poseen efectos farmacol\u00f3gicos muy diversos y dentro de los cuales se encuentran numerosos compuestos con actividad antibacteriana, anticancer\u00edgena y estimulante del sistema nervioso central. 19<\/sup> Por otro lado, las cumarinas son compuestos con probada actividad antimicrobiana. 20-21<\/sup> La presencia de estos dos grupos de metabolitos secundarios en Desmodium Canum justifica su uso para el tratamiento de enfermedades ven\u00e9reas, la disenter\u00eda y pujos. 2<\/sup><\/p>\n

En el caso de los tallos el m\u00e1ximo de absorci\u00f3n en la zona de 660 nm es mucho m\u00e1s peque\u00f1o que en las hojas, esto puede estar condicionado a la baja concentraci\u00f3n que tienen los alcaloides y quinonas en esta tintura seg\u00fan el resultado obtenido en el tamizaje fitoqu\u00edmico, por esta misma causa no se destaca la presencia de otros metabolitos secundarios en el espectro registrado.<\/p>\n

La combinaci\u00f3n de los m\u00e9todos empleados <\/p>\n

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permiti\u00f3 identificar la presencia de una gama de metabolitos de inter\u00e9s farmacol\u00f3gico, destac\u00e1ndose los flavonoides, fenoles y\/o taninos, quinonas, antocianidinas, alcaloides y cumarinas por su importancia farmacol\u00f3gica y abundancia. Estos compuestos parecen ser los responsables de las actividades curativas atribuidas a la planta Desmodium Canum. 2<\/sup> La evaluaci\u00f3n de las actividades biol\u00f3gicas aun no examinadas para esta planta y el aislamiento y caracterizaci\u00f3n de los posibles principios activos se perfilan como la ruta investigativa a seguir.<\/p>\n

Anexos – Estudio fitoqu\u00edmico de extractos y tinturas al 20% de hojas y tallos de Desmodium Canum (empanadilla) que crece en Cuba<\/strong><\/p>\n