RESUMEN<\/b><\/p>\n
Este art\u00edculo de revisi\u00f3n pretende dar a conocer la importancia de la coloraci\u00f3n de Gram como herramienta diagn\u00f3stica ya que en primera instancia permite caracterizar tama\u00f1o, forma y\/o agrupaci\u00f3n bacteriana, la reacci\u00f3n tintorial y el germen predominante en una infecci\u00f3n o en muestras contaminadas con biota normal.<\/p>\n
En esta coloraci\u00f3n tambi\u00e9n es relevante considerar la presencia de la respuesta leucocitaria o respuesta inflamatoria y otro tipo de c\u00e9lulas como las epiteliales, con el fin de orientar la presencia de infecci\u00f3n aguda o cr\u00f3nica y en algunos casos evaluar la calidad de la muestra cl\u00ednica como sucede con las muestras de esputo.<\/p>\n
<\/p>\n
Gloria In\u00e9s Morales Parra. Especialista en Microbiolog\u00eda M\u00e9dica. Docente Universidad de Santander (UDES), Universidad Popular del Cesar (UPC).Valledupar. Colombia<\/b><\/p>\n
A pesar de que en algunas muestras cl\u00ednicas esta tinci\u00f3n no tiene valor diagn\u00f3stico (far\u00edngeas, nasofar\u00edngeas y con uso muy limitado en muestras de materia fecal), puede ser aplicada a diversos espec\u00edmenes cl\u00ednicos como liquido cefalorraqu\u00eddeo, exudados, orinas, esputo, abscesos y tejidos. La coloraci\u00f3n de Gram es en la actualidad, la prueba de laboratorio de microbiolog\u00eda m\u00e1s simple y con el mejor costo efectividad, lo que representa un beneficio para el paciente, el cl\u00ednico y el laboratorio.<\/p>\n
Palabras clave:<\/b> coloraci\u00f3n de Gram, bacterias Grampositivas, bacterias Gram negativas, diagnostico microbiol\u00f3gico.<\/p>\n
REVIEW ARTICLE<\/b><\/p>\n
GRAM STAIN<\/b> AND ITS IMPORTANCE IN THE MICROBIOLOGICAL DIAGNOSIS<\/b><\/p>\n
Gloria In\u00e9s Morales Parra (1)<\/sup><\/b><\/p>\n ABSTRACT<\/b><\/b><\/p>\n This review article seeks to highlight the importance of Gram staining as a diagnostic tool because in the first instance to characterize size, shape and \/ or bacterial group, the dye reaction and germ infection or predominant in biota samples contaminated with normal. This coloration is also relevant to consider the presence of the leukocyte response or inflammatory response and other epithelial cells such as to orient the presence of acute or chronic infection and in some cases to evaluate the quality of the clinical sample as with sputum samples. Although some clinical samples this staining has no diagnostic value (pharyngeal, nasopharyngeal and very limited use in stool samples), can be applied to various clinical specimens as cerebrospinal fluid, exudates, urine, sputum, and tissue abscesses. The Gram stain is currently the microbiology laboratory testing simpler and with the best cost effectiveness, which is a benefit to the patient, the clinician and the laboratory.<\/p>\n Key words<\/b>: Gram stain, Gram positive bacteria, Gram negative bacteria, microbiological diagnosis.<\/b><\/p>\n INTRODUCCI\u00d3N<\/b><\/p>\n El advenimiento de las tinciones a mediados del siglo XIX, fue en gran parte, responsable de los principales avances que tuvieron lugar en la microbiolog\u00eda y en otros campos del diagn\u00f3stico microsc\u00f3pico durante los \u00faltimos 100 a\u00f1os. Desde los inicios de la microbiolog\u00eda la tinci\u00f3n de Gram se ha convertido en una de las tinciones diferenciales m\u00e1s usadas en la Microbiolog\u00eda, como herramienta b\u00e1sica para el diagnostico preliminar y presuntivo del agente infeccioso. Esta coloraci\u00f3n diferencial clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: Grampositivas y Gram negativas con base a las diferencias estructurales de sus paredes celulares.<\/p>\n Las caracter\u00edsticas fenot\u00edpicas que presentan algunas bacterias contribuyen a su diagnostico presuntivo: la observaci\u00f3n de cocos grampositivos dispuestos en racimos sugieren la presencia de estafilococos; la disposici\u00f3n de cocos Grampositivos en cadena indica estreptococos; diplococos Grampositivos en forma de lanceta o con extremos alargados son caracter\u00edsticos de S. pneumoniae cuando se observan en esputos, diplococos Gram negativos arri\u00f1onados o reniformes son caracter\u00edsticos de las especies de Neisseria, bacilos Grampositivos ordenados en letras chinas o empalizadas son t\u00edpicos del Corynebacterim, bacilos Gram negativos curvos en muestras de heces diarreicas indican especie de Vibrio, o si tambi\u00e9n se ven en forma de sacacorchos sugieren especies de Campylobacter(1)<\/sup>. Adem\u00e1s de proveer al microbi\u00f3logo y al cl\u00ednico las caracter\u00edsticas fenot\u00edpicas de la bacteria en cuanto a tama\u00f1o, forma, agrupaci\u00f3n y caracter\u00edsticas tintoriales, esta tinci\u00f3n es important\u00edsima ya que en algunos casos permite la instauraci\u00f3n del tratamiento r\u00e1pido y oportuno.<\/p>\n A pesar de que esta coloraci\u00f3n es un procedimiento simple, se debe tener un riguroso control de calidad del frotis, la tinci\u00f3n y el procedimiento, con el fin de minimizar los errores t\u00e9cnicos y mejorar la sensibilidad y especificidad de esta tinci\u00f3n como herramienta para el diagnostico presuntivo del agente infeccioso. <\/b><\/p>\n RESE\u00d1A HIST\u00d3RICA<\/b><\/p>\n Desde los inicios de la bacteriolog\u00eda, la coloraci\u00f3n de Gram se ha convertido en una herramienta fundamental para la taxonom\u00eda e identificaci\u00f3n bacteriana. Fue ideada por el dan\u00e9s Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), un investigador que trabajaba en el laboratorio de Carl Friedlander, el descubridor de la Klebsiella pneumoniae(2)<\/sup>. Friedlander hab\u00eda mencionado la t\u00e9cnica de su ayudante en una publicaci\u00f3n de 1883, sin darle la valoraci\u00f3n debida y el 15 de marzo de 1884 Gram hizo su propia publicaci\u00f3n (3)<\/sup>. En los a\u00f1os siguientes la utilidad de la t\u00e9cnica se hizo evidente, hasta que en 1889, en la famosa serie de los Pr\u00e9cis de\u2026, que publicaba la editorial Mason et fils en Par\u00eds, en el de Microbiolog\u00eda se recomienda someter a todos los cultivos a la tinci\u00f3n de Gram, como primera orientaci\u00f3n diagn\u00f3stica(4)<\/sup>. A pesar de que con este valioso aporte Hans C. J. Gram entraba en la galer\u00eda de los inmortales, se cree que no supo valorar la trascendencia de su m\u00e9todo de coloraci\u00f3n y esto se pudo observar cuando escribi\u00f3 \u00abHe publicado un m\u00e9todo, aunque estoy consciente de que todav\u00eda es defectuoso e imperfecto; pero deseo que en manos de otros investigadores pueda resultar de utilidad\u00bb. Hoy en d\u00eda la coloraci\u00f3n de Gram es una de los pilares del diagn\u00f3stico temprano de las infecciones bacterianas (5)<\/sup>.<\/p>\n Posteriormente, el conocimiento de las estructuras de las membranas bacterianas, en cuanto al aspecto f\u00edsico y su composici\u00f3n molecular demostraron que la coloraci\u00f3n de Gram distingue dos grupos de bacterias muy diferentes. Las bacterias Grampositivas que presentan una gruesa capa de peptidoglicano, y las Gram negativas con una delgada capa de peptidoglicano, a la que se le superpone una capa de lipopolisac\u00e1rido-lipoprote\u00edna, denominada membrana externa. La presencia de esta membrana, marca la diferencia entre las bacterias Gram negativas y las Grampositivas carentes de dicha estructura (6)<\/sup>.<\/p>\n Las c\u00e9lulas Grampositivas debido a sus gruesa paredes\u00a0de peptidoglicano y la poca cantidad de l\u00edpidos no son permeables al alcohol acetona (decolorante) puesto que este deshidrata la pared celular y cierra los poros, alterando y afectando el peque\u00f1o espacio entre las mol\u00e9culas. El complejo cristal violeta-yodo queda atrapado dentro de la pared celular ti\u00f1endo a las bacterias Grampositivas de color azul (7)<\/sup>. Las bacterias Gramnegativas tienen espacios en la estructura de su pared celular y el alcohol acetona es un solvente de l\u00edpidos que act\u00faa sobre la membrana exterior de la pared celular afectando la membrana citoplasm\u00e1tica donde se unen las mol\u00e9culas que componen el peptidoglicano. De igual manera, la delgada capa de peptidoglicano no es capaz de retener el complejo cristal violeta-yodo lo cual obliga a las c\u00e9lulas Gram negativas a decolorarse, necesitando entonces la adici\u00f3n de la safranina o la fuscina como colorante de contraste para colorearse de rosado (8)<\/sup>.<\/p>\n La tinci\u00f3n de Gram es de gran utilidad para realizar el examen directo de muestras cl\u00ednicas, porque permite determinar la calidad de ellas, la respuesta inflamatoria, la naturaleza y cantidad de microorganismos presentes y el germen predominante en una infecci\u00f3n mixta o con muestras contaminadas con biota normal. Adicionalmente, se puede correlacionar el resultado del examen directo con el resultado de los cultivos y de esta manera, disponer de un adecuado control de calidad. Este examen tiene valor diagnostico y es de informe inmediato en muestras de liquido cefalorraqu\u00eddeo y l\u00edquidos corporales, esputo, sangre, orina, abscesos, y secreciones (uretral, cervical y vaginal). No tiene valor diagnostico en muestras far\u00edngeas y nasofar\u00edngeas ya que la biota observada hace parte de la flora normal de estos sitios anat\u00f3micos. Es de uso limitado en muestras de materia fecal (el diagnostico presuntivo de infecciones por Campylobacter sp.)(9)<\/sup>.<\/p>\n El diagn\u00f3stico r\u00e1pido de microorganismos presentes en fluidos corporales est\u00e9riles, como el l\u00edquido cefalorraqu\u00eddeo, l\u00edquido pleural, peritoneal o articular, es de gran importancia para el diagn\u00f3stico de infecciones que, en estas localizaciones, son generalmente graves y secuelantes. La tinci\u00f3n de Gram constituye una herramienta de gran utilidad en el diagn\u00f3stico etiol\u00f3gico; sin embargo, la sensibilidad de esta t\u00e9cnica es variable seg\u00fan el tipo de muestra y la carga bacteriana presente en ella. La concentraci\u00f3n de la muestra, como un paso previo a su tinci\u00f3n mejora el rendimiento, por lo que es recomendable su uso de rutina (10)<\/sup>.<\/p>\n Chapin y colaboradores han demostrado que la centrifugaci\u00f3n (CT) y la citocentrifugaci\u00f3n (CC) de los fluidos corporales est\u00e9riles permite reducir la cantidad de muestra necesaria y obtener preparaciones uniformemente concentradas en un \u00e1rea de 6 mm de di\u00e1metro, aumentando el rendimiento de la t\u00e9cnica y la sensibilidad en la observaci\u00f3n bacteriana y celular (11)<\/b><\/sup>. D\u00edaz y col. demostraron que la sensibilidad para centrifugaci\u00f3n v citocentrifugaci\u00f3n fue de 89% y 61%, respectivamente. La especificidad fue de 100% para ambas t\u00e9cnicas. En una evaluaci\u00f3n cuantitativa de la celularidad de las muestras, se observ\u00f3 un aumento de los leucocitos en la centrifugaci\u00f3n con respecto a citocentrifugaci\u00f3n. Estos resultados muestran que la centrifugaci\u00f3n puede ser de gran ayuda en el diagn\u00f3stico r\u00e1pido de las infecciones de fluidos corporales con baja carga bacteriana. Presenta una mayor sensibilidad y facilita la visualizaci\u00f3n de bacterias, especialmente en muestras con bajo recuento celular (10),<\/sup> por lo que deber\u00eda implementarse en los laboratorios.<\/p>\n Esta tinci\u00f3n, constituye por lo tanto un apoyo indiscutible contra las enfermedades infecciosas y aumenta su valor en lo relativo a instaurar una terapia r\u00e1pida permitiendo la selecci\u00f3n de los antibi\u00f3ticos apropiados (12)<\/sup>. Las siguientes patolog\u00edas, son algunos ejemplos en donde la tinci\u00f3n de Gram se convierte en una herramienta important\u00edsima para el diagnostico presuntivo y definitivo del agente infeccioso:<\/p>\n La vaginosis bacteriana (VB) <\/b>es un <\/b>desorden del ecosistema vaginal caracterizado por un cambio en la flora vaginal (Lactobacilos) por microorganismos anaerobios que incluyen G. vaginalis, Mobiluncus sp, Prevotella, Bacteroides sp, Peptostreptococcus sp, entre otros, siendo la G. vaginalis el morfotipo m\u00e1s com\u00fanmente implicado en este s\u00edndrome (13)<\/sup>. En la vaginosis bacteriana, el cultivo tiene una baja sensibilidad y especificidad, ya que esta patolog\u00eda no se encuentra en el 50% de las mujeres de las cuales se aisl\u00f3 G. vaginalis (14,1,15<\/b>)<\/sup>. Adem\u00e1s, algunas bacterias como el Mobiluncus son de lento crecimiento y tardan hasta 10 d\u00edas de incubaci\u00f3n a 35\u00ba C para obtener colonias puntiformes de menos de 1 mm de di\u00e1metro (16)<\/sup>.<\/p>\n Varios estudios han demostrado que la tinci\u00f3n de Gram tiene una muy buena correlaci\u00f3n con el diagnostico de vaginosis bacteriana (17,18, 19)<\/sup>. Nugent y col, idearon un m\u00e9todo de cuantificaci\u00f3n para mejorar la correlaci\u00f3n del Gram con la vaginosis bacteriana. Cada morfotipo bacteriano encontrado en la coloraci\u00f3n (Bacilos grampositivos: Lactobacillus sp., cocobacilos Gram variables: G. vaginalis + <\/b>Bacteroides sp. y bacilos curvos Gramnegativos: Mobiluncus) es cuantificado de 1+ <\/b>a 4+<\/b>. Una vez establecida la cantidad de bacterias se les asigna un puntaje: Si la suma de los puntajes es 7 o m\u00e1s, es compatible con vaginosis bacteriana; 4 a 6 es denominado \u2018intermedio\u2019 y 0 a 3, normal (20)<\/sup>. Una notable ventaja del Gram vaginal, es que ha demostrando muy buena correlaci\u00f3n con el diagn\u00f3stico cl\u00ednico, siendo, adem\u00e1s, r\u00e1pido y de bajo costo. Adem\u00e1s, permite observar alteraciones de la flora vaginal sin que existan evidencias cl\u00ednicas de vaginosis bacteriana, raz\u00f3n por la cual ha sido considerado por diversos autores como una t\u00e9cnica objetiva, con un nivel elevado de reproducibilidad en las distintas poblaciones estudiadas (21, 22<\/b>)<\/sup>.<\/p>\n A pesar de que el sistema de puntuaci\u00f3n de Nugent tiene buena validez, exce\u00adlente capacidad diagn\u00f3stica y altamente reproduci\u00adble para el diagn\u00f3stico de vaginosis bacteriana (23, 24, 25)<\/sup> algunos autores afirman que a pesar que los par\u00e1metros de Nugent tienen muy buena sensibilidad y especificidad, deben ir mancomunados a los criterios de Amsel y col. establecidos como est\u00e1ndar para indicar la presencia de la enfermedad (26)<\/sup>; esto permite mejorar el diagnostico cl\u00ednico de este s\u00edndrome (27, 28)<\/sup>.<\/p>\n En el diagn\u00f3stico precoz de la gonorrea y su tratamiento, la evaluaci\u00f3n microsc\u00f3pica representa un elemento importante, ya que es r\u00e1pido, econ\u00f3mico y sencillo. La sensibilidad de la tinci\u00f3n de Gram para detectar N. gonorrrhoeae es pr\u00f3xima al 100% en los casos sintom\u00e1ticos de uretritis, aunque solo del 50% al 70% en pacientes asintom\u00e1ticos. La sensibilidad en ambos grupos se acerca al 100%, es decir, que los resultados falsos positivos son excepcionales (29)<\/sup>. El diagn\u00f3stico presuntivo de infecci\u00f3n por Neisseria gonorrhoeae en hombres sintom\u00e1ticos, se realiza a partir de frotis de exudados uretrales coloreados por Gram, al observarse los t\u00edpicos diplococos Gram negativos dentro de leucocitos polimorfonucleares, representando una herramienta clave para el diagn\u00f3stico de<\/p>\n <\/p>\n la uretritis gonoc\u00f3cica en hombres, dada su alta sensibilidad y especificidad(30)<\/sup>. Empero, la interpretaci\u00f3n de frotis coloreados por Gram de muestras endocervicales y rectales se considera dif\u00edcil, debido a la presencia de bacterias que interfieren con la observaci\u00f3n del gonococo o semejan diplococos, como sucede con los cocobacilos Gram negativos Moraxela osloensis, Moraxela phenylpyruvica, Kingella denitrificans y Acinetobacter spp. Por lo tanto, no es recomendable, por la baja sensibilidad y especificidad (31)<\/sup>.<\/b><\/p>\n Las infecciones del tracto urinario (ITU) se hallan entre las enfermedades infecciosas m\u00e1s frecuentes. Denotan una amplia variedad de entidades patol\u00f3gicas, en las cuales el com\u00fan denominador es la presencia de un n\u00famero significativamente grande de microorganismos en cualquier porci\u00f3n del aparato urinario. Se han dise\u00f1ado numerosos m\u00e9todos para determinar bacteriuria significativa adem\u00e1s del urocultivo: microsc\u00f3picos, qu\u00edmicos, bioqu\u00edmicos, enzim\u00e1ticos, etc., pero un n\u00famero m\u00ednimo logra ofrecer un costo adecuado y sencillez en la realizaci\u00f3n del an\u00e1lisis (32)<\/sup>.<\/p>\n La coloraci\u00f3n de Gram se ha empleado como prueba de tamizaci\u00f3n en el diagn\u00f3stico de la infecci\u00f3n del tracto urinario (ITU). La t\u00e9cnica utilizada en la mayor\u00eda de los laboratorios y estudios es la de la orina total sin centrifugar, en la cual se considera como criterio de positividad el hallazgo de una o m\u00e1s bacterias por campo de inmersi\u00f3n, lo cual se ha correlacionado con urocultivos con m\u00e1s de 10^5 <\/sup>UFC\/mL. La sensibilidad y especificidad de esta prueba var\u00edan del 65% al 94%, y del 75% al 98%, respectivamente (33, 34)<\/sup>. Por su lado, Villarroel demostr\u00f3 que la tinci\u00f3n de Gram para el diagnostico de bacteriuria tiene una sensibilidad y especificidad del 93% y 98% respectivamente (35)<\/sup>.<\/p>\n La principal ventaja de realizar el Gram de orina no centrifugada como parte de la rutina bacteriol\u00f3gica de cultivos de orina, es el diagn\u00f3stico presuntivo r\u00e1pido de infecci\u00f3n urinaria y como gu\u00eda para el tratamiento inicial basado en la forma y propiedades de la tinci\u00f3n del probable agente etiol\u00f3gico. En resumen, la gran rapidez y simplicidad de la coloraci\u00f3n de Gram de orina no centrifugada permiten detectar con alto rango de sensibilidad y especificidad la presencia de bacteriuria significativa compatible con infecci\u00f3n del tracto urinario (36)<\/sup>; adem\u00e1s, es un m\u00e9todo r\u00e1pido, econ\u00f3mico, sensible y espec\u00edfico para detectar bacteriuria. Se recomienda realizarlo como respaldo frente a discordancias o hallazgos especiales m\u00e1s que como screening. Debe aplicarse a la muestra reci\u00e9n agitada sin centrifugar. La presencia de una bacteria\/campo de inmersi\u00f3n tiene buena correlaci\u00f3n con un recuento mayor de 100.000 ufc\/ml en aproximadamente 85% – 95% de los casos (37)<\/sup>. Sin embargo, la tinci\u00f3n de Gram de una muestra de orina no se utiliza en la mayor\u00eda de los laboratorios cl\u00ednicos como prueba de cribado porque la revisi\u00f3n met\u00f3dica de los frotis es demasiado arduo.<\/p>\n La tinci\u00f3n de Gram tambi\u00e9n es de gran utilidad para evaluar las muestras de esputo. Teniendo en cuenta el n\u00famero de c\u00e9lulas epiteliales escamosas y de neutr\u00f3filos segmentados, Barlett en el a\u00f1o 1974(38)<\/sup>, ide\u00f3 un sistema en el cual se le asignan puntos negativos a un frotis que contenga c\u00e9lulas epiteliales escamosas, par\u00e1metro que indica la contaminaci\u00f3n con secreci\u00f3n orofar\u00edngea (saliva).<\/p>\n Cuando se observan la presencia de neutr\u00f3filos se le asigna una puntuaci\u00f3n positiva, que indica la presencia de inflamaci\u00f3n activa. Posteriormente Murray y Washington propusieron un sistema similar y consideraron cl\u00ednicamente relevantes las muestras que presentaran menos de 10 c\u00e9lulas epiteliales y m\u00e1s de 25 leucocitos polimorfo nucleares neutr\u00f3filos por campo de bajo poder(39)<\/sup>. Aunque este sistema de graduaci\u00f3n de esputos est\u00e1 cl\u00ednicamente aceptado para muestras de secreciones respiratorias obtenidas por expectoraci\u00f3n espontanea, no puede aplicarse si se sospecha infecciones pulmonares causadas por micobacterias, la mayor\u00eda de hongos, especies de Legionella y virus. Adem\u00e1s, el significado de la presencia de neutr\u00f3filos se altera en algunas situaciones:<\/p>\n 1) cuando el paciente est\u00e1 neutrop\u00e9nico a causa de una enfermedad o tratamiento,<\/p>\n 2) cuando el paciente no presenta una respuesta inflamatoria eficaz y<\/p>\n 3) cuando un cuerpo extra\u00f1o causa irritaci\u00f3n de la superficie de la mucosa (1)<\/sup>,por lo tanto, los resultados de la coloraci\u00f3n deber\u00edan ser correlacionada con la historia cl\u00ednica del paciente.<\/p>\n En la identificaci\u00f3n de anaerobios, l<\/b>a tinci\u00f3n de Gram es de una gran utilidad como diagn\u00f3stico presuntivo, ya que proporciona informaci\u00f3n acerca de los tipos de bacterias existentes, cantidad relativa de las mismas, presencia de leucocitos, etc. Por ejemplo, Bacteroides, por lo general, aparecen como bacilos pleom\u00f3rficos que se ti\u00f1en d\u00e9bilmente con la tinci\u00f3n de Gram; las formas cocobacilares son sugestivas de especies pigmentadas de Prevotella o Porphyromonas. Fusobacterium nucleatum suele presentarse como un bacilo Gram negativo fino y fusiforme y a menudo dispuesto en parejas, unidos por un extremo.<\/p>\n La presencia de peque\u00f1os cocos gramnegativos son indicativos de Veillonella. Los bacilos grampositivos anaerobios adoptan m\u00faltiples formas y pueden aparecer grampositivos o \u00abgramvariables\u00bb. Las esporas de Clostridium se ven raramente en las tinciones de los exudados. Un bacilo grampositivo grueso, de forma rectangular y sin esporas es sugestivo de Clostridium perfringens. Un bacilo grampositivo ramificado es sugestivo de Actinomyces o Propionibacterium. Para establecer un diagn\u00f3stico presuntivo de una infecci\u00f3n por anaerobios es importante que el microbi\u00f3logo correlacione el origen de la muestra con los morfotipos observados en la tinci\u00f3n de Gram.<\/p>\n Por otra parte, esta tinci\u00f3n es un elemento importante para el control de calidad del laboratorio. Si no se consigue aislar todos los morfotipos observados esto puede ser debido, probablemente, a alg\u00fan fallo en los distintos pasos del diagn\u00f3stico de los anaerobios (recolecci\u00f3n de la muestra, transporte o procesamiento), o bien se trata, aunque es menos com\u00fan, de una inhibici\u00f3n del microorganismo por un antibi\u00f3tico residual (40)<\/b><\/sup>.<\/b><\/p>\n El estudio microbiol\u00f3gico del l\u00edquido articular incluye: la tinci\u00f3n de Gram y la siembra en medios de cultivo convencionales con incubaci\u00f3n aerobia y anaerobia. <\/b>La coloraci\u00f3n de Gram <\/b>proporciona una informaci\u00f3n \u00fatil e inmediata en relaci\u00f3n con el diagn\u00f3stico y la orientaci\u00f3n del tratamiento. En ocasiones, puede ser el \u00fanico dato de infecci\u00f3n cuando se debe a organismos exigentes que no son capaces de crecer en el cultivo. A pesar de su utilidad, la sensibilidad y especificidad de la tinci\u00f3n de Gram no est\u00e1n bien definidas.<\/p>\n En la artritis bacteriana no gonoc\u00f3cica, se estima que la sensibilidad oscila del 29% al 50% (m\u00e1xima sensibilidad en la infecci\u00f3n por S. aureus). En la artritis gonoc\u00f3cica, la sensibilidad es mucho m\u00e1s baja, probablemente menor al 10%. Por el contrario, la especificidad es siempre muy elevada (41)<\/sup>. De lo anteriormente referenciado, se puede concluir que esta tinci\u00f3n junto con el hemocultivo, deben ser considerados como m\u00e9todos de gran aporte en la confirmaci\u00f3n microbiol\u00f3gica de las\u00a0infecciones osteoarticulares (42)<\/sup>.<\/p>\n En el diagnostico de las infecciones bacterianas del sistema nervioso central, la tinci\u00f3n de Gram del l\u00edquido cefalorraqu\u00eddeo (LCR) permite una identificaci\u00f3n bacteriana r\u00e1pida y precisa en el 60%-90% de los pacientes con una meningitis bacteriana y presenta una especificidad del 97% (1)<\/sup>. La probabilidad de que se visualice alg\u00fan microorganismo mediante esta tinci\u00f3n se correlaciona con la concentraci\u00f3n bacteriana en el l\u00edquido cefalorraqu\u00eddeo (LCR). Una concentraci\u00f3n de 103<\/sup>UFC\/ml se asocia a un 25% de positividad de la tinci\u00f3n de Gram. Una concentraci\u00f3n de 103<\/sup>-105<\/sup> UFC\/ml se asocia a un 60% de positividad y una concentraci\u00f3n mayor de 105<\/sup> UFC\/ml se correlaciona con el 97% de casos con tinci\u00f3n de Grampositiva. <\/b>La probabilidad de que esta tinci\u00f3n sea positiva depende tambi\u00e9n del tipo espec\u00edfico de bacteria que cause la meningitis. S. pneumoniae se observa en el 90% de casos, H. influenzae en el 86%, Neisseria meningitidis en el 75%, bacilos Gram negativos en el 50% y aproximadamente en un tercio de los casos de meningitis causadas por Listeria Monocytogenes se observan bacilos Grampositivos (43)<\/sup>. Por su lado, Baines afirma que la tinci\u00f3n de Gram de l\u00edquido cefalorraqu\u00eddeo (LCR) permite identificaci\u00f3n del agente etiol\u00f3gico en aproximadamente 60 a 90% de los casos de meningitis bacteriana y en el caso de meningococo esta tinci\u00f3n evidencia reacci\u00f3n leucocitaria y diplococos Gram negativos intra o extracelulares (44)<\/sup>.<\/p>\n Algunos autores consideran que la tinci\u00f3n de Gram puede ser m\u00e1s sensible que las t\u00e9cnicas de detecci\u00f3n de ant\u00edgenos (prueba de aglutinaci\u00f3n por l\u00e1tex) y que, por ello, esta tinci\u00f3n debe realizarse siempre (45)<\/sup>. Aunque la tinci\u00f3n de Gram es un m\u00e9todo r\u00e1pido, barato y espec\u00edfico para el diagn\u00f3stico de las meningitis, en los pacientes que han recibido tratamiento antibi\u00f3tico previo, la sensibilidad de esta tinci\u00f3n puede disminuir en un 20%(43)<\/sup>.<\/b>Maxson y cols. indican que un tratamiento antibi\u00f3tico oral o parenteral de menos de 24 horas de duraci\u00f3n antes de la realizaci\u00f3n de la punci\u00f3n lumbar, no da lugar, necesariamente, a una tinci\u00f3n de Gram del l\u00edquido cefalorraqu\u00eddeo (LCR) negativa(46)<\/sup>.<\/p>\n Para finalizar, a la coloraci\u00f3n de Gram se le han hecho algunas modificaciones (Hucker, Atkin, Kopeloff) que permiten visualizar ciertos microorganismos Gram negativos que se ti\u00f1en d\u00e9bilmente con el colorante de contraste, como lo son el Campylobacter sp, Legionella sp, Brucella sp, y algunos anaerobios. De otro lado, est\u00e1n los famosos gramvariables, que son tinciones de dif\u00edcil interpretaci\u00f3n cuando son realizadas a partir de cultivos ax\u00e9nicos, ya que las c\u00e9lulas observadas se ver\u00e1n al mismo tiempo como Grampositivas y Gram negativas. Extendidos muy delgados o muy gruesos, coloraciones realizadas antes de las 18 horas o despu\u00e9s de las 24 de incubaci\u00f3n, inadecuada decoloraci\u00f3n, sobrecalentamiento al fijar por calor o lavado excesivo durante la coloraci\u00f3n son errores que conllevan a obtener coloraciones gramvariables (9)<\/sup>. Por lo tanto, se debe tener un control de calidad riguroso y un buen entrenamiento del personal, par\u00e1metros que conllevaran al diagnostico presuntivo de algunos pat\u00f3genos con esta importante coloraci\u00f3n.<\/p>\n A pesar que la tinci\u00f3n de Gram es un procedimiento sencillo, se debe tener cuidado en la preparaci\u00f3n e interpretaci\u00f3n de los frotis ya que esta tinci\u00f3n puede presentar algunas *trampas* cl\u00e1sicas que pueden conducir a posibles errores. Por ejemplo, el S. pneumoniae se presenta como diplococos grampositivos en forma de lanceta, puede ser interpretado como una mezcla de microorganismos ya que una variante en su presentaci\u00f3n lo hace aparecer como cocos alargados semejantes a bacilos cortos. Las especies de Acinetobacter habitualmente son cocobacilos gramnegativos pero puede observarse tambi\u00e9n como diplococos gramnegativos confundi\u00e9ndose con especies de Neisseria. El Clostridium perfringens tiene su presentaci\u00f3n cl\u00e1sica como bacilos Grampositivos en forma de t\u00e1ndem pero puede tener la variante de presentaci\u00f3n con forma de bacilos Gram negativos o con tinci\u00f3n gramvariable pudi\u00e9ndose confundir con bacilos Gram negativos; la forma de vag\u00f3n es un indicio de que el microorganismo es Grampositivo, otros clostridios y las especies de Bacillus tambi\u00e9n pueden aparecer en forma similar (1)<\/sup>.<\/p>\n Dado que la coloraci\u00f3n de Gram es uno de los procedimientos m\u00e1s sencillos y de mayor utilidad empleados en la microbiolog\u00eda diagnostica, siempre ser\u00e1 necesario correlacionar los hallazgos encontrados en el frotis coloreado con los aislamientos bacterianos realizados de los cultivos, de otro modo se podr\u00eda caer en contaminaciones y grandes errores que no se ajustan a la realidad del paciente (12)<\/sup>.<\/p>\n En la actualidad, esta tinci\u00f3n es la prueba de laboratorio de microbiolog\u00eda m\u00e1s simple y con el mejor costo efectividad, lo que representa un beneficio tanto para el paciente como para el cl\u00ednico y el laboratorio. A pesar de su gran utilidad, este m\u00e9todo debe ser valorado con precauci\u00f3n, ya que la reacci\u00f3n puede variar seg\u00fan la edad de las c\u00e9lulas (cultivos viejos de bacterias Grampositivas pueden perder capas de peptidoglucanos y te\u00f1irse como Gram negativos) y la t\u00e9cnica empleada (al decolorar por un tiempo muy prolongado se puede correr el riesgo que bacterias Grampositivas se ti\u00f1an como gramnegativas); por esta situaci\u00f3n debe realizarse un riguroso control de calidad de la coloraci\u00f3n utilizando bacterias ATCC Grampositivas y Gram negativas como el S. aureus ATCC 25923 y la Escherichia coli ATCC 25922 cada vez que esta se realice.<\/p>\n BIBLIOGRAF\u00cdA Art\u00edculo de revisi\u00f3n. La coloraci\u00f3n de gram y su importancia en el diagn\u00f3stico microbiol\u00f3gico RESUMEN Este art\u00edculo de revisi\u00f3n pretende dar a conocer la importancia de la coloraci\u00f3n de Gram como herramienta diagn\u00f3stica ya que en primera instancia permite caracterizar tama\u00f1o, forma y\/o agrupaci\u00f3n bacteriana, la reacci\u00f3n tintorial y el germen predominante en una infecci\u00f3n … <\/p>\nTINCI\u00d3N DE GRAM COMO HERRAMIENTA DIAGNOSTICA<\/b><\/h2>\n
VAGINOSIS BACTERIANA <\/b><\/h3>\n
ENFERMEDADES DE TRANSMISI\u00d3N SEXUAL<\/b><\/h3>\n
INFECCIONES DEL TRACTO URINARIO<\/b><\/h3>\n
ESPUTO<\/b><\/h3>\n
BACTERIAS ANAEROBIAS<\/b><\/h3>\n
L\u00cdQUIDO ARTICULAR<\/b><\/h3>\n
SISTEMA NERVIOSO CENTRAL<\/b><\/h3>\n
CONCLUSIONES<\/b><\/h3>\n
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