{"id":66217,"date":"2012-11-13T17:28:35","date_gmt":"2012-11-13T16:28:35","guid":{"rendered":"https:\/\/www.revista-portalesmedicos.com\/revista-medica\/?p=66217"},"modified":"2022-03-15T09:32:49","modified_gmt":"2022-03-15T08:32:49","slug":"estudio-de-la-actividad-fosfolipasa-y-produccion-de-biofilm-como-factores-de-virulencia-en-cepas-de-levaduras-provenientes-de-muestras-clinicas","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.revista-portalesmedicos.com\/revista-medica\/estudio-de-la-actividad-fosfolipasa-y-produccion-de-biofilm-como-factores-de-virulencia-en-cepas-de-levaduras-provenientes-de-muestras-clinicas\/","title":{"rendered":"Estudio de la actividad fosfolipasa y producci\u00f3n de biofilm como factores de virulencia en cepas de levaduras provenientes de muestras cl\u00ednicas"},"content":{"rendered":"

Estudio de la actividad fosfolipasa y producci\u00f3n de biofilm como factores de virulencia en cepas de levaduras provenientes de muestras cl\u00ednicas<\/strong><\/span><\/p>\n

Candida sp. son organismos comensales de mucosa oral, intestino, etc. de individuos sanos. La colonizaci\u00f3n de este microorganismo, especialmente Candida albicans puede llevar a la infecci\u00f3n sist\u00e9mica cuando el hu\u00e9sped tiene factores de riesgo como uso continuo de antibi\u00f3ticos de amplio espectro…<\/span><\/p>\n

Puigdomenech, G.; Bulacio, L.; Garc\u00eda, M. \u2013 Salcedo S. (revisi\u00f3n)
\nLaboratorio de Microbiolog\u00eda \u2013 Instituto Superior La Salle \u2013 Rosario – Argentina<\/span><\/p>\n

Resumen<\/p>\n

La incidencia de infecciones causadas por especies de Candida se ha incrementado en los \u00faltimos a\u00f1os. Entre los factores que confieren m\u00e1s virulencia a estos organismos, las enzimas hidrol\u00edticas como fosfolipasas y proteasas juegan un papel importante, ya que act\u00faan en la invasi\u00f3n de los tejidos. Otro factor importante a considerar es la capacidad de formar biopel\u00edculas.<\/p>\n

Palabras clave: biofilm, candidiasis, fosfolipasas, virulencia<\/p>\n

Abstract
\nThe incidence of infections caused by Candida species has increased in recent years. Among the more virulence factors that confer to these organisms, hydrolytic enzymes such as phospholipases and proteases play an important role, since they act in the invasion of tissues. Another important factor to consider is the ability to form biofilms.<\/p>\n

Introducci\u00f3n<\/p>\n

Candida sp. son organismos comensales de mucosa oral, intestino, etc. de individuos sanos. La colonizaci\u00f3n de este microorganismo, especialmente Candida albicans puede llevar a la infecci\u00f3n sist\u00e9mica cuando el hu\u00e9sped tiene factores de riesgo como uso continuo de antibi\u00f3ticos de amplio espectro, esteroides u otros agentes inmunosupresores, diabetes mellitus, SIDA, depresi\u00f3n de las funciones fagoc\u00edticas o alteraciones locales del sistema gastrointestinal, situaciones que pueden ocasionar candidiasis y hasta diseminaci\u00f3n hemat\u00f3gena (1).<\/p>\n

Tanto Candida albicans como otras especies del g\u00e9nero, es un microorganismo vers\u00e1til por su capacidad de sobrevivir como comensal en varios sitios anat\u00f3micamente distintos (intestino, cavidad oral, vagina) siendo oportunista ante la m\u00ednima posibilidad. La limitaci\u00f3n de nutrientes, la competencia entre bacterias y hongos de la microbiota en la superficie de mucosas proporcionan una presi\u00f3n selectiva que ocasiona la eliminaci\u00f3n de aquellos microorganismos menos adaptados.<\/p>\n

Candida tiene atributos de virulencia para colonizar el hu\u00e9sped ocasionando da\u00f1o de forma directa, al activar, resistir o desviar mecanismos de defensa del hospedero. Los factores de virulencia expresados por el microorganismo para causar infecci\u00f3n var\u00edan seg\u00fan el tipo, sitio y naturaleza de las defensas del hu\u00e9sped (2).<\/p>\n

El fr\u00e1gil equilibrio entre el hu\u00e9sped y el hongo pat\u00f3geno deriva en una relaci\u00f3n par\u00e1sita y resulta en enfermedad, a veces, grave. La interacci\u00f3n entre el hongo y el medio ambiente est\u00e1 afectada por su variabilidad antig\u00e9nica, el cambio fenot\u00edpico y la transici\u00f3n dim\u00f3rfica. Existen diversos factores potenciales de virulencia como la morfolog\u00eda celular, actividad enzim\u00e1tica extracelular, cambio fenot\u00edpico y factores de adherencia (formaci\u00f3n de biopel\u00edculas).<\/p>\n

Candida albicans es polim\u00f3rfica que existe en forma de levadura (blastospora) o como filamentos (pseudohifa), la morfog\u00e9nesis se refiere a la transici\u00f3n entre la forma levaduriformes y la forma de crecimiento filamentosa del microorganismo. Esta conversi\u00f3n es esencial en cuanto a la virulencia de Candida albicans y otras especies, atributo que capacita al microorganismo para invadir tejidos. Se ha comprobado que el crecimiento de la forma filamentosa tiene ventajas sobre la levadura en la penetraci\u00f3n de la c\u00e9lula o tejido, y aunque la hifa puede ser id\u00f3nea para atravesar barreras tisulares, la secreci\u00f3n de enzimas capaces de degradar prote\u00ednas, l\u00edpidos y otros componentes celulares, est\u00e1 facilita su infiltraci\u00f3n en sustratos s\u00f3lidos y tejidos (3).<\/p>\n

En general, las levaduras predominan durante la colonizaci\u00f3n de la mucosa en el hu\u00e9sped sano pero la hifa emerge cuando las defensas de \u00e9ste declinan, por lo tanto, ambas formas de crecimiento podr\u00edan desempe\u00f1ar un papel importante en la patog\u00e9nesis y encontrarse en varios microambientes diferentes en el hu\u00e9sped (4).<\/p>\n

Existen hallazgos que sustentan la hip\u00f3tesis de que la filamentizaci\u00f3n es uno de los factores de virulencia del hongo: la formaci\u00f3n de filamentos a 37\u00b0C en suero humano o de conejo a pH neutro, los filamentos reci\u00e9n formados (tubos germinales) son m\u00e1s adherentes a c\u00e9lulas mam\u00edferas que las levaduras, y la adherencia en el requisito para la penetraci\u00f3n celular, y por \u00faltimo, las levaduras capturadas por macr\u00f3fagos producen filamentos y son capaces de lisar a \u00e9stos, por lo tanto la formaci\u00f3n de filamentos es una forma de evadir los mecanismos de defensa del hu\u00e9sped (5-6).<\/p>\n

En cuanto a las enzimas, se proponen a \u00e9stas como determinantes de virulencia en Candida ya que tienen la capacidad de romper pol\u00edmeros que proporcionan nutrientes accesibles para el crecimiento del hongo. Las principales enzimas extracelulares relacionadas con la patog\u00e9nesis en Candida son proteasas, fosfolipasas y lipasas. Se han descrito varios miembros de una familia de enzimas de secreci\u00f3n asp\u00e1rtico proteinasa (SAP) muy estudiadas en este hongo, en particular, las aspartil proteinasas (Saps) codificadas por genes de la familia SAP. Las prote\u00ednas que compren esta familia no se limitan s\u00f3lo a Candida albicans sino tambi\u00e9n a Candida dubliniensis, Candida tropicalis y Candida parapsilosis.<\/p>\n

Otras enzimas hidrol\u00edticas secretadas son las fosfolipasas, relacionadas con la patolog\u00eda causada por Candida albicans. Se ha demostrado cuatro tipos de fosfolipasas (PLA, PLB, PLC y PLD) de las cuales s\u00f3lo PLB ja demostrado ser necesaria para la virulencia del hongo a fin de llevar a cabo una candidiasis, la que se secreta y detecta en la punta de la hifa durante la invasi\u00f3n en tejidos (7).<\/p>\n

Las lipasas secretadas por Candida se codifican por una familia de genes con al menos diez miembros (LIP1-LIP10). El patr\u00f3n de expresi\u00f3n se ha investigado en infecciones experimentales y en pacientes con candidiasis oral (8).<\/p>\n

En cuanto a la formaci\u00f3n de biopel\u00edculas (biofilm) las especies de Candida se reconocen como los principales agentes de infecciones adquiridas en el hospital. Son el tercer o cuarto pat\u00f3geno aislado en sangre, sobrepasa la frecuencia de los bacilos gramnegativos. Los dispositivos como cat\u00e9teres intravasculares o urinarios y tubos endotraqueales como as\u00ed tambi\u00e9n los sistemas de respiraci\u00f3n mec\u00e1nica se asocian con infecciones detect\u00e1ndose la formaci\u00f3n de biopel\u00edculas en su superficie (9). Otros dispositivos como v\u00e1lvulas card\u00edacas, marcapasos y reemplazos de articulaciones (cadera y rodilla) son susceptibles de infecci\u00f3n por Candida.<\/p>\n

La mayor capacidad de Candida albicans para formar biopel\u00edculas en superficies es la raz\u00f3n por la que esta especie es m\u00e1s patog\u00e9nica que las que son menos capaces de formar estas estructuras, como es el caso de Candida glabrata, Candida tropicalis y Candida parapsilosis.<\/p>\n

La formaci\u00f3n de biofilm se distingue por adhesi\u00f3n inicial de las c\u00e9lulas de levaduras seguida por la germinaci\u00f3n y formaci\u00f3n de microcolonias, filamentizaci\u00f3n, desarrollo, formaci\u00f3n e monocapa, proliferaci\u00f3n y maduraci\u00f3n: esta formaci\u00f3n de biopel\u00edculas se lleva a cabo en tres fases, temprana (de 0 a 11 horas), intermedia (de 12 a 30 horas), y por \u00faltimo la fase madura (de 38 a 72 horas). La estructura detallada del biofilm despu\u00e9s de las 72 horas de incubaci\u00f3n consiste en una densa red de levaduras, hifas y pseudohifa, esta mezcla sumada al material matriz en medio l\u00edquido (10-11).<\/p>\n

Objetivo<\/p>\n

El objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad de secreci\u00f3n de fosfolipasas y producci\u00f3n de biofilm por parte de levaduras del g\u00e9nero Candida recuperadas de pacientes con candidiasis oral.<\/p>\n

Material y m\u00e9todo<\/p>\n

Se analizaron 93 cepas provenientes de pacientes: 48 de Candida albicans, 16 de Candida parapsilosis, 7 de Candida krusei, 5 de Candida dubliniensis, y 17 de Candida tropicalis, identificadas por m\u00e9todos de rutina.<\/p>\n

La detecci\u00f3n de actividad Fosfolipasa de evalu\u00f3 mediante el cultivo en placas de Agar Sabouraud y Agar Extracto de Malta suplementados 8% con yema de huevo, cultivo a 37\u00b0C durante cinco d\u00edas. Luego se determin\u00f3 el \u00edndice Pz que es la relaci\u00f3n entre el di\u00e1metro de la colonia y el di\u00e1metro de la colonia m\u00e1s halo de precipitaci\u00f3n.<\/p>\n

La producci\u00f3n de biofilm se evalu\u00f3 por incubaci\u00f3n de cada una de las cepas en caldo Sabouraud 2% a 30\u00b0C durante 72 horas, utilizando tubos Eppendorf, seguida de coloraci\u00f3n con soluci\u00f3n de cristal violeta y lectura de absorbancia a 530 nm.<\/span><\/p>\n

\n

\"biofilm_virulencia_levaduras\/Candida_agar_fosfolipasa\"<\/p>\n

Fosfolipasa de cepas de Candida en agar<\/p>\n

\"biofilm_virulencia_levaduras\/extracto_Malta_huevo\"<\/p>\n

Extracto de Malta suplementado con yema de huevo<\/p>\n

\"biofilm_virulencia_levaduras\/cultivo_caldo_Saboraud\"<\/p>\n

Cultivos de levaduras en Caldo Sabouraud 2%<\/p>\n

\"biofilm_virulencia_levaduras\/produccion_de_fiofilm\"<\/p>\n

Producci\u00f3n de biofilm<\/p>\n

Resultados<\/p>\n

En cuanto a la actividad Fosfolipasa, 35 cepas de Candida albicans, 1 de Candida dubliniensis, 6 de Candida krusei, 14 de Candida tropicalis y 4 de Candida parapsilosis mostraron \u00edndice [Pz] menor a 0,69; por otro lado 5 cepas de Candida albicans, 1 de Candida dubliniensis, 2 de Candida tropicalis, 1 de Candida parapsilosis, arrojaron Pz entre 0,7-0,8, mientras que 5 cepas de Candida albicans, 1 cepa de Candida dubliniensis y 1 de Candida parapsilosis, Pz entre 0,81-0,9. El resto de las cepas no presentaron actividad enzim\u00e1tica (Pz =1).<\/p>\n

Con respecto a la producci\u00f3n de biofilm: resultaron fuertes productoras de biofilm 7 cepas de Candida albicans, 6 de Candida parapsilosis, 3 de Candida krusei y 11 de Candida tropicalis, en tanto que fueron productoras d\u00e9biles 7 cepas de Candida albicans, 8 de Candida parapsilosis y 3 cepas de Candida tropicalis. El resto de las cepas estudiadas no produjeron biopel\u00edculas. El punto de corte establecido para la formaci\u00f3n de biopel\u00edcula fue: lectura de 0-0.12 negativo; de 0.13 a 0.24 producci\u00f3n d\u00e9bil y mayor a 0.24 fuerte productor de biopel\u00edcula.<\/p>\n

Discusi\u00f3n<\/p>\n

Las candidiasis se desarrollan cuando ocurre un desequilibrio en la relaci\u00f3n hospedero-par\u00e1sito que favorezca al hongo y le permita invadir tejidos m\u00e1s all\u00e1 de las mucosas donde habita en forma comensal. El factor de virulencia m\u00e1s eficiente en la penetraci\u00f3n de tejidos es la producci\u00f3n de hifas, por esta raz\u00f3n, la capacidad de producir tubo germinativo, y por lo tanto, desarrollar micelio se considera uno de los factores de virulencia m\u00e1s importante de este hongo. En la pr\u00e1ctica, \u00e9sta caracter\u00edstica es muy \u00fatil en el diagn\u00f3stico microbiol\u00f3gico de esta micosis ya que el hallazgo de hifas en el examen directo es sugestivo de infecci\u00f3n. Tanto la producci\u00f3n de biofilm y la secreci\u00f3n de enzimas hidrol\u00edticas facilitan la adherencia y posterior invasi\u00f3n de los tejidos del hospedero por parte de las levaduras. Es sumamente importante detectar estas caracter\u00edsticas a los efectos de establecer estrategias para evitar la diseminaci\u00f3n, instaurando tratamientos efectivos y precoces.<\/p>\n

Referencias bibliogr\u00e1ficas<\/strong><\/span><\/p>\n

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Leer m\u00e1s<\/a><\/p>\n","protected":false},"author":2,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"closed","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_acf_changed":false,"footnotes":""},"categories":[79,148],"tags":[6336,8946,1391,15765,15766],"class_list":["post-66217","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-enfermedades-infecciosas","category-microbiologia-parasitologia","tag-biofilm","tag-candida-albicans","tag-candidiasis","tag-fosfolipasas","tag-virulencia","no-featured-image-padding"],"acf":[],"yoast_head":"\nEstudio de la actividad fosfolipasa y producci\u00f3n de biofilm como factores de virulencia en cepas de levaduras provenientes de muestras cl\u00ednicas<\/title>\n<meta name=\"description\" content=\"Estudio de la actividad fosfolipasa y producci\u00f3n de biofilm como factores de virulencia en cepas de levaduras provenientes de muestras cl\u00ednicas Candida\" \/>\n<meta name=\"robots\" content=\"index, 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