{"id":67188,"date":"2022-04-19T12:05:56","date_gmt":"2022-04-19T10:05:56","guid":{"rendered":"https:\/\/www.revista-portalesmedicos.com\/revista-medica\/?p=67188"},"modified":"2024-04-12T10:09:16","modified_gmt":"2024-04-12T08:09:16","slug":"desarrollo-de-un-constructo-tisular-por-tecnica-de-descelularizacion-traqueal","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.revista-portalesmedicos.com\/revista-medica\/desarrollo-de-un-constructo-tisular-por-tecnica-de-descelularizacion-traqueal\/","title":{"rendered":"Desarrollo de un constructo tisular por t\u00e9cnica de descelularizaci\u00f3n traqueal"},"content":{"rendered":"<p style=\"text-align: justify;\"><strong>Desarrollo de un constructo tisular por t\u00e9cnica de descelularizaci\u00f3n traqueal<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Autor principal: Julio C\u00e9sar Flores Preciado<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Vol. XVII; n\u00ba 8; 325<!--more--><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>Development of a tissue construct by tracheal decellularization technique<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Fecha de recepci\u00f3n: 02\/03\/2022<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Fecha de aceptaci\u00f3n: 18\/04\/2022<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Incluido en Revista Electr\u00f3nica de PortalesMedicos.com Volumen XVII. N\u00famero 8 \u2013 Segunda quincena de Abril de 2022 &#8211; P\u00e1gina inicial: Vol. XVII; n\u00ba 8; 325<strong>\u00a0<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>Autores: <\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Julio C\u00e9sar Flores Preciado, Cirujano Dentista, Doctor en Ciencias \u00e1rea biomateriales y biotecnolog\u00eda. Universidad Aut\u00f3noma de Baja California, M\u00e9xico.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>RESUMEN<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">La ingenier\u00eda de tejidos es un \u00e1rea cient\u00edfica interdisciplinaria que tiene como fundamento principal, la creaci\u00f3n e implantaci\u00f3n de sustitutos biol\u00f3gicos con el objetivo de reparar, reemplazar, mantener o mejorar la funci\u00f3n espec\u00edfica de un tejido u \u00f3rgano. Mediante la combinaci\u00f3n de aspectos tecnol\u00f3gicos novedosos e innovadores, la ingenier\u00eda de tejidos y de \u00f3rganos tiene una nueva herramienta de reemplazo celular, por medio del uso de c\u00e9lulas troncales o madre las cuales pueden ser cultivas, aisladas y diferenciadas en el laboratorio para su posterior incorporaci\u00f3n a un \u00f3rgano o tejido da\u00f1ado induciendo directamente su reparaci\u00f3n estructural y funcional. El cuerpo humano, es un sistema biol\u00f3gico activo interactivo, en el cual, se desarrollan simult\u00e1nea y sistem\u00e1ticamente funciones vitales de supervivencia, mediante la interacci\u00f3n de complejos celulares, tejidos y \u00f3rganos, los cuales conjuntan sus funciones individuales y grupales espec\u00edficas para el mantenimiento de su integridad. La p\u00e9rdida funcional o estructural de forma parcial o total de un tejido u \u00f3rgano, es una condici\u00f3n que afecta frecuentemente y representa un grave problema de salud p\u00fablica por si incidencia y costos. Debido a esta creciente necesidad de \u00f3rganos, se han establecido investigaciones recientes sobre el uso de c\u00e9lulas aut\u00f3logas<sup>1<\/sup> para la reconstrucci\u00f3n de tejidos y \u00f3rganos, asegurando la biocompatibilidad<sup>2<\/sup> y evitando as\u00ed las terapias inmunosupresoras las cuales no aseguran la aceptaci\u00f3n del tejido u \u00f3rgano trasplantado, con lo cual se abre un nuevo campo en la medicina regenerativa, la regeneraci\u00f3n tisular y regeneraci\u00f3n org\u00e1nica directa.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>PALABRAS CLAVE<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">constructo, descelularizaci\u00f3n, citoesqueleto, ingenier\u00eda de tejidos, inmunofluorescencia, recelularizaci\u00f3n.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>ABSTRACT<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Tissue engineering is an interdisciplinary scientific area whose main foundation is the creation and implantation of biological substitutes with the aim of repairing, replacing, maintaining, or improving the specific function of a tissue or organ. Through the combination of new and innovative technological aspects, tissue and organ engineering has a new cell replacement tool, using stem or stem cells which can be cultivated, isolated, and differentiated in the laboratory for their subsequent incorporation into a damaged organ or tissue directly inducing its structural and functional repair. The human body is an interactive active biological system, in which vital functions of survival are developed simultaneously and systematically, through the interaction of cellular complexes, tissues and organs, which combine their specific individual and group functions for the maintenance of their health. integrity. The partial or total functional or structural loss of a tissue or organ is a condition that frequently affects and represents a serious public health problem due to its incidence and costs. Due to this growing need for organs, recent research has been established on the use of autologous cells for the reconstruction of tissues and organs, ensuring biocompatibility and thus avoiding immunosuppressive therapies which do not ensure acceptance of the transplanted tissue or organ, thus which opens a new field in regenerative medicine, tissue regeneration and direct organic regeneration.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>KEYWORDS<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">construct, decellularization, cytoskeleton, tissue engineering, immunofluorescence, recellularization.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Los autores de este manuscrito declaran que:<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Todos ellos han participado en su elaboraci\u00f3n y no tienen conflicto de intereses.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">La investigaci\u00f3n se ha realizado siguiendo las Pautas \u00e9ticas internacionales para la investigaci\u00f3n relacionada con la salud con seres humanos elaboradas por el Consejo de Organizaciones Internacionales de las Ciencias M\u00e9dicas (CIOMS) en colaboraci\u00f3n con la Organizaci\u00f3n Mundial de la Salud (OMS) https:\/\/cioms.ch\/publications\/product\/pautas-eticas-internacionales-para-la-investigacion-relacionada-con-la-salud-con-seres-humanos\/<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">El manuscrito es original y no contiene plagio.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">El manuscrito no ha sido publicado en ning\u00fan medio y no est\u00e1 en proceso de revisi\u00f3n en otra revista.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Han obtenido los permisos necesarios para las im\u00e1genes y gr\u00e1ficos utilizados.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Han preservado las identidades de los pacientes.<\/p>\n<p><strong>INTRODUCCI\u00d3N<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">La matriz extracelular (MEC) representa una red tridimensional de soporte que engloba todos los \u00f3rganos, tejidos y c\u00e9lulas del organismo. Constituye un filtro biof\u00edsico de protecci\u00f3n, nutrici\u00f3n e inervaci\u00f3n celular y el terreno para la respuesta inmune, angiog\u00e9nesis, fibrosis y regeneraci\u00f3n tisular, configurada por complejos fundamentales de prote\u00ednas y azucares que permiten establecer un microambiente celular \u00f3ptimo, indispensable para la organizaci\u00f3n y comunicaci\u00f3n inter e intracelular.<\/p>\n<p><strong><em>Tejido cartilaginoso.<\/em><\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Se caracteriza por tener una consistencia r\u00edgida, pero a la vez flexible; ofrece poca resistencia a la presi\u00f3n, recuperando su forma cuando aquella cesa, a esta propiedad se le conoce como resiliencia. Como todo tejido conjuntivo, est\u00e1 formado por c\u00e9lulas y por matriz cartilaginosa integrada a su vez por componentes amorfos y fibrilares.<\/p>\n<p><strong><em>Matriz cartilaginosa.<\/em><\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Est\u00e1 constituida por sustancia amorfa y fibras conjuntivas. La matriz amorfa est\u00e1 integrada por cadenas de mol\u00e9culas de \u00e1cido hialur\u00f3nico que se unen mediante enlaces no covalentes con 100 o 200 mol\u00e9culas de glucosaminoglicanos<sup>3<\/sup> unidos a trav\u00e9s de prote\u00ednas de enlace formando proteoglicanos<sup>4<\/sup>. Los glucosaminoglicanos formadores de proteoglicanos son el \u00e1cido condroit\u00edn-4-sulfato, condroit\u00edn-6- sulfato y el hepar\u00e1n sulfato, los cuales tienen la capacidad de albergar una cantidad considerable de mol\u00e9culas de agua. La viscosidad y densidad de la matriz y el contenido de agua permiten la difusi\u00f3n de sustancias para que se realice el metabolismo del tejido. La matriz fibrilar esta configura por fibras conjuntivas del tipo: col\u00e1genas, reticulares y el\u00e1sticas.<\/p>\n<p><strong><em>Complejos celulares cartilaginosos.<\/em><\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">El tejido cartilaginoso est\u00e1 conformado b\u00e1sicamente por tres complejos celulares, las c\u00e9lulas condrog\u00e9nicas, los condroblastos y los condrocitos. Las c\u00e9lulas condrog\u00e9nicas derivan de las c\u00e9lulas mesenquimatosas, tienen forma de huso (fusiformes), ligeramente alargadas, pudi\u00e9ndose diferenciar a c\u00e9lulas osteo-condr\u00f3genas dependiendo del microambiente que las rodea. Los condroblastos tienen forma fusiforme cuyo contorno se modifica paulatinamente a ovaladas, poseen un citoplasma bas\u00f3filo, adem\u00e1s de conservar la capacidad de reproducirse, originando a otros condroblastos o diferenciarse en condrocitos j\u00f3venes. Finalmente, los condrocitos, son las c\u00e9lulas m\u00e1s abundantes del cart\u00edlago con una funci\u00f3n esencial en la s\u00edntesis y secreci\u00f3n de matriz cartilaginosa. Los condrocitos ocupan cavidades de la matriz denominadas lagunas cartilaginosas donde pueden albergarse dos o m\u00e1s c\u00e9lulas, especialmente en cart\u00edlagos de individuos adultos<sup>5,6,7<\/sup>.<\/p>\n<p><strong><em>Proceso de obtenci\u00f3n y transformaci\u00f3n de bioestructuras.<\/em><\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Debido al sin n\u00famero de afecciones y padecimientos, en la actualidad con los conocimientos de ingenier\u00eda de tejidos, medicina regenerativa y medicina traslacional, los estudios se han centrado en la generaci\u00f3n de nuevos materiales y alternativas para la sustituci\u00f3n de \u00f3rganos y tejidos da\u00f1ados. Existen t\u00e9cnicas muy prometedoras para la reparaci\u00f3n o regeneraci\u00f3n de tejidos y \u00f3rganos, mediante el empleo de biomateriales como estructuras de armaz\u00f3n, adaptaci\u00f3n e inclusi\u00f3n por medio del uso directo del \u00f3rgano afectado como andamio biol\u00f3gico natural o nativo, aunado a la potencial y muy prometedora terapia celular mediante la aplicaci\u00f3n directa de c\u00e9lulas madre o troncales, las cuales, con su elevada capacidad de diferenciaci\u00f3n, promuevan la regeneraci\u00f3n del tejido y \u00f3rgano, siguiendo con estos conceptos la triada de la ingenier\u00eda de tejidos. As\u00ed c\u00f3mo es posible la regeneraci\u00f3n de tejidos de forma artificial y de una pr\u00e1ctica m\u00e1s frecuente, tambi\u00e9n existe la posibilidad de la formaci\u00f3n u obtenci\u00f3n artificial de \u00f3rganos completos o porciones de estos a partir de la ingenier\u00eda de tejidos, a los cuales se les conoce como \u201cbio\u00f3rganos<sup>8<\/sup>\u201d.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">El proceso de bioformaci\u00f3n u obtenci\u00f3n de un \u00f3rgano artificial, se desarrolla mediante una t\u00e9cnica doble, basada en un estudio <em>in vitro<\/em> e <em>in vivo<\/em>. Un \u00f3rgano artificial es aquel que se obtiene mediante recursos biol\u00f3gicos externos al organismo a implantar o bien, propios del individuo receptor, con ello se evita el rechazo debido a que los complejos empleados son aut\u00f3logos o propios y son construidos con el uso de c\u00e9lulas cultivadas en un armaz\u00f3n o andamio nativo o natural.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">El mecanismo de obtenci\u00f3n de un armaz\u00f3n biol\u00f3gico para su posterior repoblaci\u00f3n celular o reconstrucci\u00f3n tisular se conoce como proceso de descelularizaci\u00f3n y recelularizaci\u00f3n<sup>9,10<\/sup>, a diferencia de un armaz\u00f3n sint\u00e9tico el cual emplea un andamio a base de un biomaterial que a su vez es repoblado con c\u00e9lulas cultivadas o derivadas de igual forma del individuo receptor. El mecanismo para la obtenci\u00f3n de un \u00f3rgano artificial <em>in vitro<\/em> se establece en dos etapas<sup>11<\/sup>:<\/p>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li>Descelularizaci\u00f3n: esta etapa consiste en la eliminaci\u00f3n total de contenido celular y tisular del \u00f3rgano, conservando la matriz extracelular compuesta por tejido conjuntivo de soporte no especializado (generalmente col\u00e1geno o elastina) as\u00ed como tambi\u00e9n los componentes vasculares y nerviosos.<\/li>\n<li>Recelularizaci\u00f3n: la cual consiste en la adici\u00f3n o resembrado de c\u00e9lulas, que mediante un crecimiento <em>in vitro<\/em>, son inducida para su proliferaci\u00f3n y diferenciaci\u00f3n, en el \u00f3rgano descelularizado <em>in vitro<\/em> e <em>in vivo<\/em>.<\/li>\n<\/ul>\n<p><strong>METODOLOG\u00cdA<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>\u00a0<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Las etapas de trabajo experimental van desde la obtenci\u00f3n y procesamiento de la muestra, el desarrollo de la t\u00e9cnica de descelularizaci\u00f3n mediante el uso de detergentes y enzimas para la obtenci\u00f3n de la matriz extracelular org\u00e1nica evaluada y validada mediante t\u00e9cnicas bioqu\u00edmicas, histol\u00f3gicas, inmunol\u00f3gicas y de microscopia.<\/p>\n<p><strong><em>Obtenci\u00f3n y procesamiento de la muestra.<\/em><\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">De manera inicial se llev\u00f3 a cabo la identificaci\u00f3n de las muestras traqueales a tratar basadas en su configuraci\u00f3n cartilaginosa y abundancia de matriz extracelular con el objeto de uso en la obtenci\u00f3n de la bioestructura.<sup>1 <\/sup>Para la obtenci\u00f3n se estandariz\u00f3 un protocolo de recepci\u00f3n y transporte basado en la preservaci\u00f3n, almacenaje y transporte con el prop\u00f3sito de disminuir y frenar los procesos de degradaci\u00f3n celular siguiendo los principios de hiperosmolaridad<sup>3<\/sup> y el de riqueza de potasio.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Posterior a la obtenci\u00f3n de las muestras, se procedi\u00f3 a la identificaci\u00f3n de las dos regiones que la conforman, la regi\u00f3n cervical que se extiende de la regi\u00f3n inferior del cart\u00edlago cricoides al borde superior del manubrio esternal y, la regi\u00f3n tor\u00e1cica formada por una serie de 12 a 16 anillos cartilaginosos, de esta \u00faltima regi\u00f3n se obtuvieron las muestras que finalmente fueron sometidas al proceso de descelularizado, ver imagen n<sup>o<\/sup>1: obtenci\u00f3n y procesamiento de las muestras traqueales (al final del art\u00edculo).<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Posterior a la resecci\u00f3n<sup>8<\/sup> traqueal, las muestras fueron lavadas repetidamente con agua desionizada para la eliminaci\u00f3n de restos sangu\u00edneos y de fluidos org\u00e1nicos, como medida de preservaci\u00f3n previa al proceso de descelularizaci\u00f3n, las muestras fueron almacenadas en soluci\u00f3n de medio de cultivo celular en base de: Medio DMEM<sup>12<\/sup> adicionado con soluci\u00f3n amortiguadora de antibi\u00f3tico y antimic\u00f3tico de Penicilina G 500U\/mL, estreptomicina 500 \u00b5g\/mL y Anfotericina B 1.25 \u00b5g\/mL.<\/p>\n<p><strong><em>T\u00e9cnica de descelularizaci\u00f3n traqueal.<\/em><\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Como protocolo inicial, se estableci\u00f3 un proceso de descongelaci\u00f3n de las muestras traqueales en agua desionizada a temperatura ambiente. Posterior a la descongelaci\u00f3n, se continu\u00f3 con el proceso de descelularizaci\u00f3n de las muestras bajo el siguiente protocolo:<\/p>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li><strong>Solubilizaci\u00f3n de las membranas:<\/strong> las muestras fueron colocadas en una soluci\u00f3n de inmersi\u00f3n a base de Trit\u00f3n X-100<sup>13<\/sup> al 3% y SDS<sup>14<\/sup>, ver tabla n<sup>o<\/sup>1: caracter\u00edsticas del proceso de lavado secuencial (al final del art\u00edculo) en una placa agitadora a 150 rpm a 4 <sup>o<\/sup>C de temperatura. La serie de lavados secuenciales permiten al detergente i\u00f3nico surfactante o agente tensoactivo, solubilizar las membranas celulares mediante la degradaci\u00f3n de las prote\u00ednas incrustadas o perif\u00e9ricas. Este procedimiento se realiz\u00f3 por 48 horas de agitaci\u00f3n mec\u00e1nica, con recambio de la soluci\u00f3n de inmersi\u00f3n a las 24 horas de agitaci\u00f3n.<\/li>\n<li><strong>Fase de extracci\u00f3n secuencial:<\/strong> permiti\u00f3 la eliminaci\u00f3n de los componentes celulares, la descelularizaci\u00f3n y desinfecci\u00f3n del tejido aislado. Para ello se estableci\u00f3 un protocolo de descelularizaci\u00f3n de siete ciclos (2.5 d\u00edas de extracci\u00f3n secuencial) ver tabla n<sup>o<\/sup>2: protocolo de descelularizaci\u00f3n (al final del art\u00edculo). El proceso de descelularizado se llev\u00f3 a cabo con ambos detergentes i\u00f3nicos (Trit\u00f3n X-100 y SDS) ver imagen n<sup>o<\/sup>2: fase de extracci\u00f3n secuencial del proceso de descelularizado (al final del art\u00edculo) y dos etapas digestivas (DNAsa\/RNAsa) como un protocolo comparativo entre t\u00e9cnicas, ver tabla n<sup>o<\/sup>3: etapas digestivas y lavados secuenciales (al final del art\u00edculo).<\/li>\n<\/ul>\n<p><strong><em>Preparaci\u00f3n final de la matriz extracelular cartilaginosa obtenida.<\/em><\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Las porciones traqueales descelularizadas fueron segmentadas en unidades &lt;5cm de longitud, ver imagen n<sup>o<\/sup>3: procesamiento de la muestra descelularizada (al final del art\u00edculo) y lavadas doblemente en soluci\u00f3n de PBS<sup>15<\/sup> estandarizado, para posteriormente ser desinfectado durante 1 hora en soluci\u00f3n de etanol al 4% y el posterior almacenamiento en congelado cr\u00edptico a -80 <sup>o<\/sup>C, con el objetivo de regular la constituci\u00f3n tisular y continuar con la fase de valoraci\u00f3n, bioqu\u00edmica, histol\u00f3gica, inmunol\u00f3gica y de microscopia.<\/p>\n<p><strong><em>T\u00e9cnicas y ensayos de validaci\u00f3n de resultados.<\/em><\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Para la validaci\u00f3n del proceso de descelularizaci\u00f3n, se implementaron ensayos bioqu\u00edmicos, histol\u00f3gicos y de microscop\u00eda.<\/p>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li><strong>Ensayos bioqu\u00edmicos: extracci\u00f3n, purificaci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de ADN.<\/strong> Para el establecimiento de la t\u00e9cnica se establecieron grupos control y muestra correspondiente a porciones traqueales descelularizadas, ver tabla n<sup>o<\/sup>4: grupos de trabajo para validaci\u00f3n del protocolo de descelularizado (al final del art\u00edculo). El protocolo de validaci\u00f3n bioqu\u00edmica se conform\u00f3 por tres etapas, una inicial de digesti\u00f3n enzim\u00e1tica, seguido de la etapa de lisis y precipitaci\u00f3n de prote\u00ednas y posteriormente la etapa de precipitaci\u00f3n y rehidrataci\u00f3n del ADN, ver tabla n<sup>o<\/sup>5: etapas del ensayo bioqu\u00edmico de validaci\u00f3n (al final del art\u00edculo). Finalmente, para la obtenci\u00f3n y registro de resultados, la t\u00e9cnica de elecci\u00f3n corresponde a espectrofotometr\u00eda UV\/Visible, datos que son expresados en la secci\u00f3n de resultados.<\/li>\n<\/ul>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li><strong>Ensayos histol\u00f3gicos: t\u00e9cnica de hematoxilina y eosina.<\/strong> Para la t\u00e9cnica de tinci\u00f3n se obtuvieron muestras de 1.5cm<sup>2<\/sup> por microtom\u00eda, seguido del protocolo de tinci\u00f3n: fijaci\u00f3n, inclusi\u00f3n, coloraci\u00f3n o tinci\u00f3n y montaje, ver tabla n<sup>o<\/sup>7: proceso de tinci\u00f3n histol\u00f3gica (al final del art\u00edculo).<\/li>\n<li><strong>Microscop\u00eda:<\/strong> establece la identificaci\u00f3n de los componentes proteicos asociados a la matriz extracelular, as\u00ed como tambi\u00e9n los complejos de azucares asociados a prote\u00ednas (oligosac\u00e1ridos y polisac\u00e1ridos) presentes en la matriz extracelular y con una funci\u00f3n adicional de comunicaci\u00f3n y adhesi\u00f3n celular, datos que son expresados en la secci\u00f3n de resultados.<\/li>\n<\/ul>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li><strong>RESULTADOS<\/strong><\/li>\n<\/ul>\n<p><strong><em>Extracci\u00f3n, purificaci\u00f3n y cuantificaci\u00f3n de ADN.<\/em><\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">La espectrofotometr\u00eda UV\/Visible permite confirmar que se cuenta con cantidad suficiente de \u00e1cidos nucleicos (DNA\/RNA) de calidad antes de llevar a cabo ensayos de PCR cuantitativa en tiempo real (QRTPCR), an\u00e1lisis de SNPS (polimorfismos de nucle\u00f3tido \u00fanico) o la secuenciaci\u00f3n autom\u00e1tica de muestras de ADN de pl\u00e1smidos, t\u00e9cnicas histol\u00f3gicas e inmunol\u00f3gicas, as\u00ed como tambi\u00e9n valoraci\u00f3n por microscopia. El an\u00e1lisis de resultados de los controles y muestras llevadas a lectura muestran las lecturas de DO a 260 y 280 nm, la raz\u00f3n de pureza (DO 260\/280) y las concentraciones de ADN obtenidas, ver tabla n<sup>o<\/sup>6: DO obtenida para muestra y tejido descelularizado por espectrofotometr\u00eda (al final del art\u00edculo).\u00a0 Las muestras descelularizadas procesadas y graficadas indican una baja concentraci\u00f3n (contenido) de \u00e1cidos nucleicos a comparaci\u00f3n de las muestras control correspondientes a un tejido con baja concentraci\u00f3n de poblaciones celulares ver figura n<sup>o<\/sup>1: DO, lecturas y validaciones obtenidas por espectrofotometr\u00eda (al final del art\u00edculo).<\/p>\n<p><strong><em>An\u00e1lisis histol\u00f3gico y de microscop\u00eda.<\/em><\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Mediante el an\u00e1lisis histol\u00f3gico por la t\u00e9cnica de hematoxilina-eosina es posible detectar componentes celulares y estructuras \u00e1cidas (hematoxilina) como el n\u00facleo, el contenido nuclear (ADN) y componentes presentes en la matriz extracelular (glucosaminoglicanos) ti\u00f1\u00e9ndolos de un color azul y purpura. Mientras que las estructuras b\u00e1sicas (eosina) como las regiones proteicas en el citoplasma y redes de col\u00e1gena en la matriz extracelular que son te\u00f1idas en un color rosado. El an\u00e1lisis microsc\u00f3pico evidencia las diferencias entre los protocolos de descelularizaci\u00f3n traqueal no estandarizado y estandarizado, ver imagen n<sup>o<\/sup>4: an\u00e1lisis de microscopia por hematoxilina-eosina (al final del art\u00edculo) donde la presencia abundante de fibras proteicas en la matriz extracelular hace referencia a niveles de descelularizaci\u00f3n por arriba del 80-85%.<\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>Respecto a la metodolog\u00eda de descelularizaci\u00f3n establecida:<\/strong><\/p>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li>Con el ajuste de la t\u00e9cnica de descelularizaci\u00f3n, en cuanto a la modificaci\u00f3n de los tiempos de lavado y el uso de detergentes, se estableci\u00f3 una diferencia significativa en el promedio de descelularizado de los tejidos alcanzando niveles por arriba del 85-90%.<\/li>\n<li>Es necesario ajustar las concentraciones de los detergentes y algunos intervalos adicionales, con lo cual es posible incrementar el grado de descelularizaci\u00f3n a un 90 a 95%, los cuales, seg\u00fan la bibliograf\u00eda, es un nivel \u00f3ptimo para la consideraci\u00f3n de grado de descelularizaci\u00f3n aceptable biol\u00f3gicamente.<\/li>\n<li>Es necesario establecer estrategias que corresponden a terapia celular, utilizaci\u00f3n de mol\u00e9culas inductoras de regeneraci\u00f3n tisular y el uso de bioconstrucciones que fueron obtenidos mediante la t\u00e9cnica de ingenier\u00eda tisular.<\/li>\n<\/ul>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>Respecto a la continuidad:<\/strong><\/p>\n<p style=\"text-align: justify;\">Una vez obtenidos los constructos tisulares es posible identificar el seguimiento y los estudios futuros para el proceso de recelularizado:<\/p>\n<ul style=\"text-align: justify;\">\n<li>Implementar un sistema tisular (constructo tridimensional), formado por las c\u00e9lulas aisladas, la matriz extracelular descelularizada y agentes proteicos inductores.<\/li>\n<li>Implementar un sistema tisular <em>in vitro<\/em> e <em>in vivo<\/em> en una zona de defecto, para guiar y producir un remodelado y regeneraci\u00f3n.<\/li>\n<li>Establecimiento del protocolo de citotoxicidad y biocompatibilidad de la matriz extracelular.<\/li>\n<li>Evaluaci\u00f3n morfol\u00f3gica por microscopia electr\u00f3nica, para la confirmaci\u00f3n del grado de descelularizaci\u00f3n del tejido y la evaluaci\u00f3n morfol\u00f3gica y funcional de la matriz extracelular, as\u00ed como el desarrollo de la fase de recelularizaci\u00f3n con lo cual se evaluar\u00e1 la viabilidad del constructo.<\/li>\n<\/ul>\n<h2 style=\"text-align: justify;\"><a href=\"https:\/\/www.revista-portalesmedicos.com\/imagenes\/publicaciones\/2022\/constructo-tisular-descelularizacion-traqueal.pdf\" target=\"_blank\" rel=\"noopener noreferrer\"><strong>Ver anexo<\/strong><\/a><\/h2>\n<p style=\"text-align: justify;\"><strong>BIBLIOGRAF\u00cdA<\/strong><\/p>\n<ol>\n<li style=\"text-align: justify;\">Doss, A. E., Dunn, S. S., Kucera, K. A., Clemson, L. A., &amp; Zwischenberger, J. B. (2007). Tracheal replacements: part 2.\u00a0<em>ASAIO Journal<\/em>,\u00a0<em>53<\/em>(5), 631-639.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Cornell, C. N., Lane, J. M., Chapman, M., Merkow, R., Seligson, D., Henry, S., &#8230; &amp; Vincent, K. (1991). Multicenter trial of Collagraft as bone graft substitute.\u00a0<em>Journal of orthopaedic trauma<\/em>,\u00a0<em>5<\/em>(1), 1-8.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Birchall, M. A., Elliott, M. J., Lowdell, M., &amp; De Coppi, P. (2013). Stem-cell-based, tissue-engineered tracheal replacement in a child\u2013Authors&#8217; reply.\u00a0<em>The Lancet<\/em>,\u00a0<em>381<\/em>(9861), 113.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Ten Hallers, E. J. O., Rakhorst, G., Marres, H. A. M., Jansen, J. A., Van Kooten, T. G., Schutte, H. K. &amp; Verkerke, G. J. (2004). Animal models for tracheal research.\u00a0<em>Biomaterials<\/em>,\u00a0<em>25<\/em>(9), 1533-1543.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Zapata-Linares, N. M., Zuluaga, N. J., Betancur-Gallego, S. N., &amp; L\u00f3pez-Rojas, L. E. (2014). Cultivo de tejido cartilaginoso articular: acercamiento conceptual.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Ferr\u00e1ndiz, M. O. (2021).\u00a0<em>Regeneraci\u00f3n de cart\u00edlago mediante el uso de c\u00e9lulas madre de pulpa dental humanas (hdpscs)<\/em>(Doctoral dissertation, Universitat de Val\u00e8ncia).<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Dikina, A. D., Strobel, H. A., Lai, B. P., Rolle, M. W., &amp; Alsberg, E. (2015). Engineered cartilaginous tubes for tracheal tissue replacement via self-assembly and fusion of human mesenchymal stem cell constructs.\u00a0<em>Biomaterials<\/em>,\u00a0<em>52<\/em>, 452-462.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Geutjes, P. J., Daamen, W. F., Buma, P., Feitz, W. F., Faraj, K. A., &amp; Kuppevelt, T. H. V. (2006). From molecules to matrix: construction and evaluation of molecularly defined bioscaffolds.\u00a0<em>Tissue engineering<\/em>, 279-295.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Fu, R. H., Wang, Y. C., Liu, S. P., Shih, T. R., Lin, H. L., Chen, Y. M., &#8230; &amp; Lin, S. Z. (2014). Decellularization and recellularization technologies in tissue engineering.\u00a0<em>Cell transplantation<\/em>,\u00a0<em>23<\/em>(4-5), 621-630.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Gilpin, A., &amp; Yang, Y. (2017). Decellularization strategies for regenerative medicine: from processing techniques to applications.\u00a0<em>BioMed research international<\/em>,\u00a0<em>2017<\/em>.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Guruswamy Damodaran, R., &amp; Vermette, P. (2018). Tissue and organ decellularization in regenerative medicine.\u00a0<em>Biotechnology progress<\/em>,\u00a0<em>34<\/em>(6), 1494-1505.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Roomans, G. M. (2010). Tissue engineering and the use of stem\/progenitor cells for airway epithelium repair.\u00a0<em>Eur Cell Mater<\/em>,\u00a0<em>19<\/em>(284), 99.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Grimmer, J. F., Gunnlaugsson, C. B., Alsberg, E., Murphy, H. S., Kong, H. J., Mooney, D. J., &amp; Weatherly, R. A. (2004). Tracheal reconstruction using tissue-engineered cartilage.\u00a0<em>Archives of Otolaryngology\u2013Head &amp; Neck Surgery<\/em>,\u00a0<em>130<\/em>(10), 1191-1196.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Jungebluth, P., Bader, A., Baiguera, S., M\u00f6ller, S., Jaus, M., Lim, M. L., &#8230; &amp; Macchiarini, P. (2012). The concept of in vivo airway tissue engineering.\u00a0<em>Biomaterials<\/em>,\u00a0<em>33<\/em>(17), 4319-4326.<\/li>\n<li style=\"text-align: justify;\">Kalathur, M., Baiguera, S., &amp; Macchiarini, P. (2010). Translating tissue-engineered tracheal replacement from bench to bedside.\u00a0<em>Cellular and molecular life sciences<\/em>,\u00a0<em>67<\/em>(24), 4185-4196.<\/li>\n<\/ol>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Desarrollo de un constructo tisular por t\u00e9cnica de descelularizaci\u00f3n traqueal Autor principal: Julio C\u00e9sar Flores Preciado Vol. XVII; n\u00ba 8; 325<\/p>\n","protected":false},"author":981,"featured_media":0,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_acf_changed":false,"footnotes":""},"categories":[52,168],"tags":[14429,16018,16019,14430,16020,16021],"class_list":["post-67188","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-cirugia-maxilofacial","category-odontologia-estomatologia","tag-citoesqueleto","tag-constructo","tag-descelularizacion","tag-ingenieria-de-tejidos","tag-inmunofluorescencia","tag-recelularizacion","no-featured-image-padding"],"acf":[],"yoast_head":"<!-- This site is optimized with the Yoast SEO plugin v26.6 - https:\/\/yoast.com\/wordpress\/plugins\/seo\/ -->\n<title>Desarrollo de un constructo tisular por t\u00e9cnica de descelularizaci\u00f3n traqueal<\/title>\n<meta name=\"description\" content=\"Desarrollo de un constructo tisular por t\u00e9cnica de descelularizaci\u00f3n traqueal Autor principal: Julio C\u00e9sar Flores Preciado Vol. XVII; 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