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Recogida, transporte y procesamiento de muestras para análisis microbiológico ocular

Recogida, transporte y procesamiento de muestras para análisis microbiológico ocular

Resumen:

El método de recogida de material biológico ocular depende de la estructura o secreción a la que se quiera acceder para su estudio. En caso de estructuras superficiales, se deberá recoger la muestra sin alterarla previamente con tratamientos o colirios tópicos y mínimamente durante los métodos de recogida. No deben admitirse muestras si han transcurrido más de 24 horas de la toma y sin medio de transporte. Las instrucciones de recogida de muestras oculares que se muestran en este artículo son una recopilación de las recomendadas por la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica (SEIMC).

Blasco-Martínez, Alejandro1; Del Prado-Sanz, Eduardo2; Cameo-Gracia, Beatriz1; Soriano-Pina, Diana1; Pérez-Velilla, Javier1; Clemente-Urraca, Sara1; Mateo-Orobia, Antonio3

1: Graduado Óptico-Optometrista. Universidad de Zaragoza

2: FEA Oftalmología. HU Royo Villanova. Zaragoza

3: FEA Oftalmología. HU Miguel Servet. Zaragoza

 

Palabras clave:

Microbiología; microorganismos; SEIMC; muestras oculares; instrucciones; infección

1) Exudado conjuntival

Recogida: Durante la toma de la muestra ha de evitarse el contacto con el borde del párpado para no arrastrar la microbiota colonizante. Si se sospecha infección por Chlamydia hay que tomar una torunda adicional y colocar la muestra en el medio de transporte específico que utilice el laboratorio. Del mismo modo en caso de infección vírica la muestra debe introducirse en un medio de transporte adecuado para virus.

Se frota la conjuntiva tarsal con un hisopo de Dacrón o Alginato conservado en medio de transporte de Amies. Si la mucosa está seca, empapar la torunda en caldo triptona-soja (TSB) o en caldo infusión cerebro-corazón (BHI) antes de tomar la muestra. Además, debe obtenerse una segunda muestra sin medio de transporte para poder efectuar un examen microscópico.

Transporte: En general, se recomienda la utilización del medio de Amies para el transporte de una muestra de exudados, y conservar entre 4 y 8ºC hasta su procesamiento en laboratorio.

Procesamiento: La muestra se inocula directamente en medios sólidos reaislando al menos en tres estrías para poder estimar la cantidad de crecimiento. Si se ha empleado un caldo como medio de transporte, éste debe homogeneizarse agitándolo antes de inocularlo en medios sólidos.1, 2

2) Raspado corneal

La presencia bacteriana en los raspados puede variar entre 100 a 300 Unidades Formadoras de Colonias (UFC) en una muestra entre 1 y 3μL, lo que quiere decir que es tan baja que se ve afectada significativamente por la presencia de antibióticos tópicos, reduciendo la sensibilidad del cultivo en un 30-40%.

Recogida: No existe consenso sobre el instrumento o el procedimiento a seguir para la toma de muestra, pero se pueden utilizar, anestesiando previamente la lesión, espátulas de Kimura, hoja Bard-Parker, hojas de bisturí por el extremo no cortante, agujas estériles o escobillones empapados en caldo tioglicolato. Se debe raspar tanto el fondo de la úlcera como los bordes.

Transporte: Tradicionalmente, el raspado corneal se sembraba directamente en medios sólidos en la misma consulta del oftalmólogo, pero esta práctica presenta varios inconvenientes por lo que se recomienda transportarla al laboratorio para su procesamiento. Para ello, se puede utilizar un medio de Amies, BHI o TSB.

Procesamiento: Para cualquier muestra corneal, debe emplearse un caldo de enriquecimiento TSB, BHI o tioglicolato antes de inocularla en medios sólidos.1, 2

3) Biopsia corneal

La toma de una biopsia corneal está indicada en los siguientes casos:

  • La infección corneal no responde al tratamiento.
  • Los cultivos de los raspados han sido negativos y continúa la sospecha clínica de queratitis infecciosa.
  • La infección se localiza en las capas profundas del estroma inaccesibles al raspado.

Recogida: La biopsia puede realizarse con el microscopio quirúrgico con una hoja pequeña, utilizando trépanos de 2-3 mm de diámetro. Se lleva a cabo trepanación no penetrante y con ayuda de un cuchillete o espátula se finaliza la queratectomía parcial. También se ha utilizado láser para realizar queratectomías superficiales.

Transporte: Se deben remitir al laboratorio de forma urgente en contenedor estéril con una pequeña cantidad de solución salina o en caldo BHI, TSB o de tioglicolato.

Procesamiento: El recomendado para cualquier muestra corneal, descrito en el punto anterior.1, 2

4) Lente de Contacto

Recogida: El porta-lentes de contacto es el elemento más frecuentemente contaminado. Se puede cultivar el porta-lentes, la propia lente de contacto, los fluidos adheridos a ella resultantes de su uso o los líquidos de conservación que han estado en contacto con la lente o el estuche. Tiene utilidad en los casos de sospecha de infección bacteriana o por Acanthamoeba spp.

Transporte: El medio de transporte y cultivo puede ser o tubos con solución salina de Page o agar no nutriente con una cepa de E. coli. Si no se dispone de estos medios, se debe remitir al laboratorio de forma urgente en contenedor estéril con una pequeña cantidad de solución salina.

Procesamiento: Se raspa con la hoja de un bisturí por la cara cóncava y se inocula en medio sólido.1, 2, 3, 4

5) Humor acuoso y Humor vítreo

La toma de muestras de ambos fluidos tiene sentido en casos de sospecha de endoftalmitis o vitritis.

Recogida: Las muestras de humor acuoso pueden obtenerse por punción y aspiración. Para las muestras de humor vítreo se recomienda la vitrectomía por pars plana y lavado para evitar tracciones vítreas. Las guías actuales la recomiendan no solo en casos avanzados de endoftalmitis, sino también en agudos, ya que permite obtener una mayor cantidad de muestra, reduce la carga microbiana del vítreo (y por tanto la inflamación) y además disminuye la probabilidad de reintervención.5

Transporte: Deben remitirse de forma urgente al laboratorio en contenedor estéril o en viales de hemocultivo pediátricos, ya que se trata de muestras con escaso volumen.

Procesamiento: La muestra de humor vítreo debe concentrarse mediante filtración con filtros estériles de polivinilo o mediante centrifugación. Cultivar inoculando en medio sólido añadiendo caldo de enriquecimiento TSB, BHI o tioglicolato.1, 2

6) Lente intraocular

Recogida: También en casos de endoftalmitis post-quirúrgica, se puede cultivar la lente intraocular completa o fragmentos capsulares.

Transporte: Una vez extraída la lente se introduce en 0,5ml de solución salina estéril o en caldo BHI, TSB o de tioglicolato y se remite de forma urgente al laboratorio.5

Procesamiento: La lente debe agitarse vigorosamente durante al menos 10 minutos en la solución salina de transporte para permitir el desprendimiento de células.1, 2

7) Exudado palpebral

Recogida: Se frota el borde del párpado o de la zona ulcerada con una torunda de algodón, Dacrón o Alginato previamente humedecida en caldo TSB o BHI.

Transporte: Se recomienda la utilización del medio de Amies para el transporte de una muestra de exudados y conservar entre 4 y 8ºC hasta su procesamiento en laboratorio, como se ha comentado anteriormente.

Procesamiento: Mismo procedimiento que para los exudados conjuntivales.1, 2

8) Muestras del aparato lagrimal

Recogida: Aspirar el exudado purulento procedente del canal o del saco lagrimal con una jeringa. También se puede aspirar y cultivar el material obtenido durante una dacriocistotomía o canaliculotomía.

Si hay concreciones en el canal lagrimal, se deben extraer con una espátula o cureta y extender en un portaobjetos para su posterior tinción.

Transporte: El contenido de la jeringa debe remitirse al laboratorio en contenedores con atmósfera reducida para detección de microorganismos anaerobios.

Procesamiento: Mismo procedimiento que para muestras corneales.1, 2

Bibliografía:

  1. Etxebarría J, López-Cerero L, Mensa J. Diagnóstico microbiológico de las infecciones oculares. En: Cercenado E, Cantón R, editores [Internet]. Procedimientos en Microbiología Clínica: Recomendaciones de la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. 1a ed. España: SEIMC;2008.2-14. [citado 15 Jun 2016]. Disponible en:

https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seimc-procedimientomicrobiologia31.pdf

  1. López-Cerero L, Etxebarria J, Mensa J. Diagnóstico microbiológico de las infecciones oculares. Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. 2009;27(9):531-535.
  2. Lo J, Fang PC, Chien CC, Hsiao CC, Tseng SL, Lai YH. PCR analysis for assessment of bacterial bioburden in orthokeratology lens cases. Molecular Vision. 2016;22:1-8.
  3. Pérez-Pomata T, Pérez-Álvarez MJ, Rodríguez-Zurita ME, Moreno-López M. Queratitis en portador de lentes de contacto. Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. 2006;24(4):280-282.
  4. Merayo-Lloves J, Riestra AC, Galarreta D, Cordovés L, Alfonso JF. Manejo de la endoftalmitis en cirugía de cataratas. Barcelona: Ediciones Mayo; 2014.