posteriormente la determinación de la lactato deshidrogenasa (LDH), donde junto a otras enzimas y las proteínas cardiacas ofrecen ventajas para el diagnóstico temprano de la necrosis del músculo cardiaco, pues se destacan por su sensibilidad y especificidad y su alto valor predictivo de infarto agudo del miocardio y de muerte súbita. (5) Corroborándose lo anterior con el diagnóstico de anatomía patológica.
Metódica
Se realizó un estudio con diseño experimental con control concurrente. El nivel de dosis fue seleccionado a través de un ensayo de toxicidad aguda oral por el método de las clases. Para el estudio de la cardiotoxicidad se emplearon variables bioquímica, morfológicas y clínicas que fueron tomadas en el marco de un ensayo de toxicidad a dosis repetida de 28 días, a la aplicación de acetato de plomo en ratas Sprague Dawley. (6)
Para determinar la dosis de toxicidad se utilizó un método alternativo al convencional, clase tóxica aguda (CTA) (Guía 423 de la Organización para la Cooperación Económica y el Desarrollo (OECD), 1996 y 2000) (7) y a continuación se utilizó un estudio de Toxicidad a dosis repetida por un periodo de 28 días. Guía 407 de la OECD. (8)
Se utilizaron seis ratas hembras para concebir el primer estudio. Teniendo en cuenta la solubilidad posible del acetato de plomo 410 mg/mL, 1 se formuló la dosis a administrar de acuerdo con el peso del animal del día 0. El ensayo comenzó con la dosis de 2 000 mg/kg y en el segundo estudio se utilizaron 50 animales distribuidos 10 ratas por grupo y nivel de dosis (5 ratas hembras y 5 ratas machos), como se muestra en la siguiente tabla.
Tabla 1: Grupos control y experimentales en el ensayo de dosis repetidas vía oral de la solución de acetato de plomo
Grupos – Niveles de dosis (mg/kg) – Número de animales (Hembras – Machos)
Control:
0 – 5 – 5
Máxima 1000 – 5 – 5
Experimental:
Media 500 – 5 – 5
Mínima 250 – 5 – 5
Satélite: 1000 – 5 – 5
Los animales del grupo satélite se mantuvieron en observación 14 días más después de los 28 días y con ellos se siguieron los mismos procedimientos que con el resto de los animales de los grupos experimental y control.
Se incluyó además el estudio macroscópico con el examen de la superficie externa e interna del cuerpo, así como el pesaje del corazón, que como peso final a tabular será determinado sobre la base de la división entre el peso del órgano y el peso corporal último, correspondiente a los días 28 y 42, respectivamente, según grupo y análisis del corazón.
Y por ultimo de este grupo de variable el estudio histopatológico donde se tomaron muestras del corazón de los animales de todos los grupos. Las muestras se fijaron en formol al 10 % neutro, fueron procesadas por el método de parafina, se colorearon con hematoxilina-eosina para su posterior observación al microscopio óptico Jenamed 2 Carl Zeiss, alemán. (9)
Análisis de los resultados
Para la dosis utilizada de 2000 mg/kg no hubo señales de cardiotoxicidad por el método de las clases (CTA); donde se observan que después de la administración de la solución de acetato de plomo, y hasta los 14 días de observación se registró un 100% de supervivencia, con una conducta normal. El estudio histopatológico arrojó que no presentaban ninguna alteración macroscópica.
El gráfico 1 refleja que los animales tuvieron un aumento significativo (p < 0,05) del peso corporal entre los días del ensayo, por lo que se confirma que el producto no ejerció ningún tipo de toxicidad en las ratas.
Gráfico 1. Peso promedio de los animales pertenecientes al grupo experimental
Estos resultados difieren con los del estudio de toxicidad aguda de Arrate Padilla en el 2005, que refiere una dosis letal media con acetato de plomo de 250 mg ⁄ kg de peso corporal para este mismo modelo biológico, que tampoco demostró alteraciones cardiovasculares, (3) y coinciden con los datos referidos por Gonzáles Valdez en el 2007, que en los signos y síntomas en la intoxicación aguda por plomo no se constatan manifestaciones cardiovasculares. (10)
En continuidad con el estudio proseguimos con la administración a dosis repetida por un espacio de 28 días donde el ensayo concluyó con un 100% de supervivencia.
La gráfica 2 indica la variación en el peso corporal en los animales en estudio; existen diferencias estadísticamente significativas (p < 0,05) entre los días del ensayo dentro de cada grupo, así como entre los diferentes sexos.
Las hembras a las que se les administró la dosis de 1 000 mg ⁄ kg no tuvieron un aumento estadístico significativo de peso, con igual comportamiento las hembras de la dosis 500 mg ⁄ kg y la del grupo satélite. Los machos con dosis de 1.000 mg ⁄ kg se mantuvieron sin aumento estadístico considerable de peso, al igual que el grupo experimental del satélite.
Gráfico 2: Variación del peso corporal (g) en ratas Sprague Dawley en el ensayo de toxicidad a dosis repetida de una solución de acetato de plomo. Hembras.
En los gráficos 3 y 4 se puede apreciar la variabilidad de las determinaciones enzimáticas, en especial las enzimas aspartato aminotransferasa (TGO) y lactato deshidrogenasa (LDH), biomarcadores por excelencia de alteraciones cardiovasculares y la alanin aminotransferasa (TGP). Solo se encontraron diferencias estadísticamente significativas (p < 0,005) entre los grupos experimentales con dosis de 1 000 mg ⁄ kg y el satélite en los dos sexos para la enzima TGO. Aunque debemos señalar que el resto de los otros grupos presentó alteraciones de gran significación biológica; así como para la enzima TGP no hubo ninguna variación estadísticamente significativa ni biológica. Sin embargo, las alteraciones en la enzima LDH mostraron extremada significación biológica, con disminución secuencial según dosis empleadas, aunque solo el satélite presentó significación estadística.
Debemos reflejar el comportamiento del satélite; con la proyección del posible efecto de acumulación que este responde, por la muestra de los resultados obtenidos que aun pasados 14 días se muestra igual que con el nivel máximo de dosis.